二代測序——基因組測序該測幾個G?
1、人類全基因組測序
常規(guī)全基因組測序:一般建議測序深度為30X-50X,人類基因組大小約為3G,因此數(shù)據(jù)量通常在90G-150G左右。這樣的測序深度可以較為***地檢測到基因組中的各種變異,包括單核苷酸多態(tài)性(SNP)、插入缺失(Indel)、結構變異(SV)等,適用于大多數(shù)疾病研究、群體遺傳學研究以及個體遺傳特征分析等。
高深度全基因組測序:對于一些特殊的研究目的,如檢測低頻變異、體細胞突變等,可能需要更高的測序深度,達到100X甚至更高。此時數(shù)據(jù)量會相應增加到300G及以上,這種高深度測序能夠更靈敏地發(fā)現(xiàn)罕見的遺傳變異,但成本也會大幅提高。 二代測序與Sanger測序相同嗎?南京嘉安健達二代測序運用
宏基因組二代測序,你了解多少?
宏基因組二代測序(mNGS)是一項覆蓋病原譜廣且高通量的檢測技術,已在臨床領域得到了廣泛的應用。對于血液病患者,病原mNGS通過對樣本快速高通量測序,可以獲得更準確、相對無偏倚的病原信息,對病原診斷起到積極的作用,尤其對傳統(tǒng)微生物學檢測未覆蓋到或檢測周期較長、陽性率較低的病原可提高檢出率。對于臨床相關樣本應首先完善傳統(tǒng)微生物學檢測,病理、無菌標本培養(yǎng)仍然是診斷的金標準,病原mNGS是對傳統(tǒng)微生物學檢測的有力補充和延展而非替代。病原mNGS的報告解讀應充分評估檢出微生物的致病性、流行病學、生物信息學信息,同時在結合患者臨床特征的基礎上進行綜合判斷。 遼寧哪里有二代測序檢測NGS測序是二代測序嗎?
二代測序——轉錄組測序的實驗流程(上)
樣本采集和 RNA 提取
樣本采集需要考慮研究目的和樣本類型。例如,研究**組織的轉錄組,就要準確獲取**組織樣本,同時比較好有對應的正常組織作為對照。RNA 提取方法有多種,常用的如 Trizol 法,它可以有效地從細胞或組織中提取總 RNA,包括 mRNA、rRNA 和 tRNA 等。提取后的 RNA 質量至關重要,需要通過瓊脂糖凝膠電泳或專門的 RNA 質量檢測儀器來評估 RNA 的完整性和純度。
RNA 質量檢測和定量
完整性方面,通常使用 RNA 完整性指數(shù)(RIN)來衡量。RIN 值越高(一般認為 RIN > 7 是高質量 RNA),說明 RNA 完整性越好。定量方法主要有紫外分光光度法和熒光定量法。紫外分光光度法可以通過測量 RNA 在 260nm 和 280nm 處的吸光度比值來估計 RNA 純度,比值在 1.8 - 2.0 之間表示純度較好。熒光定量法則是使用專門的熒光染料(如 Qubit)來更準確地測量 RNA 濃度。
文庫構建
首先要進行mRNA富集,一般使用帶有poly-T的磁珠來特異性地捕獲mRNA,因為真核生物mRNA的3'端都有poly-A尾巴。然后將mRNA反轉錄為cDNA,再通過超聲或酶切等方法將cDNA片段化,片段大小通常在幾百個堿基對左右。之后在片段兩端連接上測序接頭,經過PCR擴增來增加文庫的量,使其達到可以上機測序的要求。
②二代測序一般多久出結果?
2、測序平臺和通量
不同的二代測序平臺有不同的通量(一次能測序的樣本數(shù)量和數(shù)據(jù)量)和測序速度。一些高通量的測序平臺,如IlluminaNovaSeq系列,能夠在較短時間內產生大量的數(shù)據(jù)。但如果使用的是通量較低的小型測序儀,或者測序儀的運行時間被多個項目分配,都會影響結果產出的時間。例如,在高通量平臺上進行全基因組測序,測序運行時間可能在2-7天左右,具體取決于測序深度等因素。而對于一些小型臺式測序儀進行靶向基因測序,運行時間可能在1-3天。 二代測序的優(yōu)勢是低成本。
二代測序——RNA甲基化的概念、作用和檢測方法
RNA 甲基化概念及位置:RNA 甲基化是在 RNA 分子上添加甲基基團,其中 N6 - 甲基腺苷(m6A)是最常見的一種 RNA 甲基化修飾形式,它主要發(fā)生在 mRNA(信使 RNA)的腺嘌呤(A)殘基上。
作用
1、影響 RNA 的穩(wěn)定性:m6A 修飾可以影響 mRNA 的穩(wěn)定性。例如,一些帶有 m6A 修飾的 mRNA 更容易被降解,從而調控基因表達的時間和水平。2、調節(jié) RNA 的剪接和翻譯:m6A 修飾還能夠調節(jié) mRNA 的剪接過程,影響不同轉錄本的生成。同時,它也可以在翻譯水平上發(fā)揮作用,影響蛋白質合成的效率。
檢測方法
甲基化 RNA 免疫沉淀測序(MeRIP - Seq):這種方法主要是利用特異性識別 m6A 修飾的抗體,對 RNA 進行免疫沉淀富集,然后通過高通量測序來鑒定 m6A 修飾的位點和水平。 基因組重測序是二代測序嗎?陜西嘉安健達二代測序技術
二代測序可以檢測基因嗎?南京嘉安健達二代測序運用
二代測序的應用領域有哪些?
基因組學研究:用于全基因組測序,快速獲取物種的基因組序列信息,研究基因組結構、變異、進化等;進行全外顯子組測序,重點關注編碼蛋白質的外顯子區(qū)域,發(fā)現(xiàn)與疾病相關的基因突變。
轉錄組學研究:通過對轉錄組進行測序,可分析基因的表達水平、可變剪接、新轉錄本發(fā)現(xiàn)等,有助于深入了解基因在不同生理和病理狀態(tài)下的表達調控機制。
疾病診斷與***:在遺傳病診斷中,能夠檢測出導致遺傳病的基因突變,為疾病的診斷、遺傳咨詢和產前診斷提供依據(jù);在**研究中,可分析腫瘤細胞的基因突變、拷貝數(shù)變異、基因融合等,為**的早期診斷、靶向***和預后評估提供支持。
藥物研發(fā):用于藥物靶點的發(fā)現(xiàn)和驗證,通過分析疾病相關的基因變異和表達變化,確定潛在的藥物作用靶點;還可進行藥物基因組學研究,預測患者對藥物的反應和不良反應,實現(xiàn)個體化藥物***。
微生物學研究:對微生物群落進行宏基因組測序,無需培養(yǎng)即可分析微生物的種類、豐度和功能基因,了解微生物群落的結構和動態(tài)變化,研究微生物與宿主的相互作用,以及在環(huán)境科學、農業(yè)、醫(yī)學等領域的應用
南京嘉安健達二代測序運用