編輯|steins來源|島津分析中心背景摘要:紫外可見分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)都經(jīng)常用于樣品定量。使用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行定量時(shí)基于朗伯比爾定律，測(cè)定的吸收值一定范圍內(nèi)與樣品濃度成正比。另一方面，利用熒光分光光度計(jì)時(shí)，使用熒光強(qiáng)度。在低濃度時(shí)，熒光強(qiáng)度與濃度成正比，所以，可以用于定量。本次使用紫外可見分光光度計(jì)和熒光分光光度計(jì)兩臺(tái)儀器分別測(cè)定了羅丹明B溶液。羅丹明B是用于纖維和皮革的染色的熒光物質(zhì)。關(guān)于測(cè)定結(jié)果，對(duì)兩個(gè)機(jī)種的定量、檢測(cè)下限值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性度進(jìn)行了比較，下面將進(jìn)行介紹。1紫外1羅丹明B溶液的吸光度測(cè)定使用了紫外可見分光光度計(jì)UV-260Oi測(cè)定樣品吸光度。測(cè)定條件如表1所示。將粉末狀的羅丹明B溶解在蒸餾水中，調(diào)配～5ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光光譜如圖1所示，根據(jù)544nm的吸光度值創(chuàng)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2和圖3所示。在圖2中，用～5ug/ml的6點(diǎn)和空白樣品（蒸餾水）創(chuàng)建，得到了線性度良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線（相關(guān)系數(shù)的平方值是)。在圖3所示的低濃度區(qū)域中，噪聲的影響相對(duì)較大，導(dǎo)致線性較差。2熒光2羅丹明B溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定使用了熒光分光光度計(jì)RF-60O0測(cè)定了樣品熒光強(qiáng)度。測(cè)定條件如表2所示。上海元析光度計(jì)誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)。上海分光光度計(jì)操作

并交替通過入射狹縫進(jìn)入單色器中，經(jīng)離軸拋物鏡將光束平行地投射在光柵上，色散并通過出射狹縫之后，被濾光片濾除高級(jí)次光譜，再經(jīng)橢球鏡聚焦在探測(cè)器的接收面上。探測(cè)器將上述交變的信號(hào)轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號(hào)，經(jīng)放大器進(jìn)行電壓放大后，轉(zhuǎn)入A/D轉(zhuǎn)換單位，計(jì)算機(jī)處理后得到從高波數(shù)到低波數(shù)的紅外吸收光譜圖。JC-HW30A雙光束紅外分光光度計(jì)二、紫外可見分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)的概述不同：1、紫外分光光度計(jì)的概述：根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是比較大吸收波長(zhǎng)λmax和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很***的應(yīng)用。在國(guó)內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的比較大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。2、紅外分光光度計(jì)的概述：由光源發(fā)出的光，被分為能量均等對(duì)稱的兩束，一束為樣品光通過樣品，另一束為參考光作為基準(zhǔn)。這兩束光通過樣品室進(jìn)入光度計(jì)后，被扇形鏡以一定的頻率所調(diào)制，形成交變信號(hào)。三、紫外可見分光光度計(jì)和紅外分光光度計(jì)的應(yīng)用不同：1、紫外分光光度計(jì)的應(yīng)用：將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)。廣東uv光度計(jì)選購(gòu)光度計(jì)怎么選用適合自己的？

在儀器改變測(cè)試波長(zhǎng)和測(cè)試一段時(shí)間后可通過按0%鍵和100%/0A鍵對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)零和調(diào)滿度、吸光度。顯示方式的選擇【相關(guān)實(shí)驗(yàn)】鄰二氮菲吸光光度法測(cè)定鐵的含量報(bào)告實(shí)驗(yàn)?zāi)康泥彾莆夤舛确y(cè)定鐵的含量；熟悉722N型分光光度計(jì)的原理和操作。實(shí)驗(yàn)原理鄰二氮菲吸光光度法是測(cè)定鐵含量的常用方法。在PH為2~9的溶液中，F(xiàn)e2+的顯色劑鄰二氮菲形成穩(wěn)定的橘紅色絡(luò)合物，該絡(luò)合物在508nm波長(zhǎng)處有大吸收。為了消除Fe2+的副反應(yīng)及其他因素的影響，在微酸溶液進(jìn)行，且用鹽酸羥胺將Fe3+還原為Fe2+。吸光光度法定量分析的依據(jù)是朗伯比爾定律A=?bc，當(dāng)液層厚度b一定時(shí)A=Kc，吸光光度法定量分析的方法有直接比較法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法，這個(gè)實(shí)驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試液中鐵的含量，按下式求出原始待測(cè)溶液中鐵的含量（ρ表示溶液中鐵的含量，mg/L）ρFe,原始待測(cè)溶液=ρFe,標(biāo)準(zhǔn)曲線查得50/10實(shí)驗(yàn)步驟1、取出容量瓶和移液管，用蒸餾水清洗容量瓶并用相應(yīng)的溶液潤(rùn)洗移液管；在6個(gè)容量瓶中用刻度移液管分別加入，5mLHAc-NaAc緩沖溶液，1mL10%鹽酸羥胺溶液及，用水定容。

可以對(duì)某一種物質(zhì)進(jìn)行全波段掃描，分析物質(zhì)的特征波長(zhǎng)，判斷實(shí)驗(yàn)過程的誤差）；多波長(zhǎng)測(cè)試（可以對(duì)物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行多個(gè)波長(zhǎng)的測(cè)試，分析物質(zhì)的相關(guān)特性）；還有可以進(jìn)行DNA蛋白質(zhì)測(cè)試、總磷總氮測(cè)試、重金屬測(cè)試、農(nóng)藥殘留測(cè)試、食品安全檢測(cè)、熱力發(fā)電金屬離子測(cè)試等。2.波長(zhǎng)范圍可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)適用范圍一般從350nm左右開始到1100nm左右，紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)適用范圍一般從190nm到1100nm。從這點(diǎn)區(qū)別上看就是波長(zhǎng)的適用范圍不一樣，紫外可見分光光度計(jì)多了從190到350nm左右這段波長(zhǎng)。3.光源不同可見分光光度計(jì)的光源一般只用鎢燈，而紫外可見分光光度計(jì)是用鎢燈氘燈兩個(gè)光源，同時(shí)還多了這兩個(gè)光源燈的切換部件。這是因?yàn)殒u燈的光譜范圍主要在可見到近紅外這段，氘燈主要在紫外端。也正是因?yàn)楣庠吹牟灰粯樱贤饪梢姺止夤舛扔?jì)也多了一個(gè)專門提供氘燈工作的氘燈電源了。4.光學(xué)器件不同由于玻璃能吸收紫外波，而對(duì)可見到近紅外端有比較好的透過性，所以可見分光光度計(jì)的一些光學(xué)部件可以使用玻璃，而紫外可見分光光度計(jì)就不能使用玻璃部件，一般使用石英光學(xué)部件。同時(shí)由于這個(gè)原因，在比色皿的選擇上也就有不同了，可見分光光度計(jì)可以使用玻璃制的比色皿。尋找光度計(jì)的優(yōu)良代理廠家。

光度計(jì)在使用過程中，由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化、燈絲變形、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象，因而導(dǎo)致儀器靈明度降低，影響測(cè)定結(jié)果的精度，需要進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度較簡(jiǎn)單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值,如果，測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定,則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié)。用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10%、20%、30%左右的光譜中性濾光片，可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長(zhǎng)處，以空氣為參比，分別測(cè)量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長(zhǎng)處，以高氯酸溶液為參比，測(cè)量其透射比。上海元析光度計(jì)誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)！浙江元析光度計(jì)教程

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并發(fā)現(xiàn)吸收光譜相似的有機(jī)物質(zhì)，它們的結(jié)構(gòu)也相似。并且，可以解釋用化學(xué)方法所不能說明的分子結(jié)構(gòu)問題，初步建立了紫外可見分光光度計(jì)的理論基礎(chǔ)，以此推動(dòng)了紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展。1918年美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局研制成了世界上diyi臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)(不是商品儀器，很不成熟)。此后，紫外可見分光光度計(jì)很快在各個(gè)領(lǐng)域的分析工作中得到了應(yīng)用。朗伯早在1760年就發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)的厚度成正比，后被人們稱之為朗伯定律;比耳在1852年又發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)濃度成正比，后被人們稱之為比耳定律。在應(yīng)用中，人們把朗伯定律和比耳定律聯(lián)合起來，又稱之為朗伯-比耳定律。隨后，人們開始重視研究物質(zhì)對(duì)光的吸收，并試圖在物質(zhì)的定性、定量分析方面予以使用。因此，許多科學(xué)家開始研究以比耳定律為理論基礎(chǔ)的儀器裝置。經(jīng)過一個(gè)漫長(zhǎng)的時(shí)期后，美國(guó)Beckman公司于1945年，推出世界上diyi臺(tái)成熟的紫外可見分光光度計(jì)商品儀器。從此，紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用開始得到飛速發(fā)展。紫外可見分光光度計(jì)的展望紫外可見分光光度計(jì)雖然是一類有著很長(zhǎng)歷史的分析儀器，但每一次吸收了新的技術(shù)成果都使它煥發(fā)出新的活力。上海分光光度計(jì)操作

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