分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對(duì)應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個(gè)吸收峰的波長。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,對(duì)波長準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。超微量分光光度計(jì)氙氣閃光燈為燈源;新疆uv分光光度計(jì)推薦
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實(shí)驗(yàn)精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。為了測量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。貴州火焰分光分光光度計(jì)購買超微量分光光度計(jì)適于蛋白質(zhì)、DNA、RNA樣品的快速檢測.
在測試結(jié)束后需要將進(jìn)樣管放入蒸餾水中沖洗反應(yīng)系統(tǒng),關(guān)閉氬氣瓶壓力閥,關(guān)閉蠕動(dòng)泵開關(guān),松開蠕動(dòng)泵泵卡;然后關(guān)閉原子熒光光度計(jì)的主機(jī)和電腦電源。整個(gè)操作過程較簡單,容易上手。需要注意的是在原子熒光光度計(jì)測試完成后一定要清洗。沖洗結(jié)束后,先關(guān)閉氬氣瓶閥門,等到原子熒光光度計(jì)中的余氣流盡,報(bào)警以后,關(guān)閉原子熒光光度計(jì)主機(jī)電源并松開蠕動(dòng)泵的泵卡。等到儀器冷卻后,為原子熒光光度計(jì)罩上儀器罩。等到數(shù)據(jù)處理之后。
在測量準(zhǔn)確性和精確度時(shí),將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時(shí),測定三個(gè)測試濾光片在對(duì)應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個(gè)波長的變異系數(shù)。許多分光光度計(jì),包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個(gè)特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動(dòng)自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個(gè)部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機(jī)誤差來校驗(yàn)檢測器,通過檢查大能量、隨機(jī)誤差、基準(zhǔn)傳感器的信號(hào)和光強(qiáng)度來校驗(yàn)光源。超微量分光光度計(jì)不需要預(yù)熱,可隨時(shí)檢測,檢測時(shí)間短!
它還通過測定紫外光譜范圍內(nèi)強(qiáng)度峰值位置的精確度來確定波長的系統(tǒng)及隨機(jī)誤差。遵照這些建議來維護(hù)分光光度計(jì),那么在今后的使用過程中再也不用擔(dān)心測量結(jié)果有問題啦。分光光度法始于牛頓(Newton)。早在1665年牛頓作了一介罈人的實(shí)驗(yàn):他讓太陽光透過暗室窗上的小圓孔,在室內(nèi)形成很細(xì)的太陽光束,該光束經(jīng)棱鏡色散后,在墻壁上呈現(xiàn)紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫的色帶。這色帶就稱為“光譜”。頓通過這個(gè)實(shí)驗(yàn);揭示了太陽光是復(fù)合光的事實(shí)。紫外可見分光光度計(jì)的鎢燈光源發(fā)出400~760nm波長的光譜。山西原子吸收分光光度計(jì)原理
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在上述6個(gè)容量瓶中對(duì)應(yīng)的溶液中鐵的含量不同其中鐵含量為,其余溶液構(gòu)成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。并用移液管吸取,并編號(hào)為7。將溶液放置15min左右;3、接通722N分光光度計(jì)電源,調(diào)節(jié)分光光度計(jì)的透光度T示數(shù)為(即T%=100%)發(fā)現(xiàn)此時(shí)吸光度A的示數(shù)位,波長調(diào)節(jié)至510nm條件下;4、拿出比色皿,一次只能測四種溶液,先用1、2、3、4號(hào)容量瓶中的溶液分別潤洗(不能搞混了),并依次倒入編號(hào)溶液(不能倒太滿,否則容易溢出),用面巾紙擦干比色皿表面尤其是光滑的一面。將擦干裝有對(duì)應(yīng)溶液的比色皿依次放入分光光度計(jì)的光路中使測定的順序?yàn)?、2、3、4(要蓋上儀器的蓋子)。記錄對(duì)應(yīng)的吸光度;5、將4上述測完的比色皿拿出,將溶液倒入廢液缸中,先用蒸餾水洗凈4只比色皿。在按4步驟中的方法進(jìn)行操作,此時(shí)的溶液編號(hào)為5、6、7。記錄對(duì)應(yīng)的吸光度;6、將記錄的數(shù)據(jù)在電腦上用ORANGE軟件進(jìn)行處理。并繪出相應(yīng)的圖,并根據(jù)原理求出原始待測溶液中鐵的含量;7、實(shí)驗(yàn)完畢斷開分光光度計(jì)電源,清洗玻璃儀器和比色皿,整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)離開實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理結(jié)果記錄及討論標(biāo)準(zhǔn)系列的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及測定結(jié)果鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL鐵含量。新疆uv分光光度計(jì)推薦
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