由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對(duì)不同波長(zhǎng)光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長(zhǎng)的混合光中,將每一種單色光分離出來(lái),并測(cè)量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見(jiàn)光區(qū),分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬比較大不超過(guò)3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來(lái)自棱鏡或光柵,具有較高的精度。分光光度計(jì)?就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器??梢?jiàn)火焰光度計(jì)一般使用玻璃比色皿即可,而紫外可見(jiàn)火焰光度計(jì)的紫外區(qū)段需使用石英比色皿。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
分光光度計(jì)分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)核酸或者蛋白樣品濃度**常用的工具之一。儀器使用頻繁,但甚少見(jiàn)到有人維護(hù)。其實(shí),保持分光光度計(jì)清潔、無(wú)污染是成功操作的關(guān)鍵。清潔儀器我們應(yīng)該用蘸有中性清潔劑的軟布擦拭分光光度計(jì)的表面。刺激性的清潔劑可能會(huì)損壞儀器表面。你也可以清潔比色皿本身。比色皿插槽只能用蘸有乙醇或異丙醇的無(wú)絨棉簽來(lái)清潔。這可防止液體進(jìn)入內(nèi)部。如果你必須要用水清潔,那么可用蘸有乙醇或異丙醇的棉簽來(lái)加速干燥。比色皿插槽的蓋子也可以清潔,但不是泡在清潔劑中。如有必要,拆下蓋子,用蘸有溫和清潔劑的軟布或無(wú)絨棉簽來(lái)清潔。此外,平時(shí)不使用時(shí),應(yīng)蓋上比色皿插槽的蓋子,以免灰塵或其他污染物落入。消毒和凈化如果分光光度計(jì)被微生物所污染,那么可采用下列步驟進(jìn)行消毒和凈化。首先,利用溫和的清潔劑來(lái)清潔設(shè)備。然后,用蘸有消毒劑(通常是酒精溶液)的軟布擦拭表面。如有必要,拆下并清潔比色皿插槽。檢查組件維護(hù)的另一方面在于檢查分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確性。Eppendorf提供了一個(gè)濾光片系統(tǒng)(BioSpectrometerreferencefilterkit),以評(píng)估光度準(zhǔn)確性和系統(tǒng)的波長(zhǎng)誤差。試劑盒包含一個(gè)空白濾光片、三個(gè)檢查光度的濾光片和三個(gè)校正波長(zhǎng)的濾光片。上海生物火焰光度計(jì)廠家保持紫外-可見(jiàn)火焰光度計(jì)表面和工作環(huán)境的清潔。
光度計(jì)在使用過(guò)程中,由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化、燈絲變形、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤(pán)上的讀數(shù)與實(shí)際通過(guò)溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象,因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測(cè)定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度較簡(jiǎn)單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值,如果,測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定,則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié)。用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10%、20%、30%左右的光譜中性濾光片,可見(jiàn)光區(qū)分別在440、546、635nm波長(zhǎng)處,以空氣為參比,分別測(cè)量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長(zhǎng)處,以高氯酸溶液為參比,測(cè)量其透射比。
由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長(zhǎng)與儀器的波長(zhǎng)讀數(shù)值間都存在一定的誤差。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。3、雜散光雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來(lái)一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。使用與維護(hù)1、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng),需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。2、指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈。溫、濕度較高的地區(qū)應(yīng)特別注意勿使紫外可見(jiàn)火焰光度計(jì)受潮。
雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來(lái)一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng),需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。不用紫外-可見(jiàn)火焰光度計(jì)時(shí),請(qǐng)及時(shí)關(guān)機(jī)、并拔掉電源插頭,以防止雷雨天氣可能造成的損壞。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
紫外可見(jiàn)火焰光度計(jì)常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途
在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開(kāi)光門(mén)),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開(kāi)光門(mén)),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。四川光度計(jì)火焰光度計(jì)用途