紫外-可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法原理,利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進行分析的一種分析儀器。主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。其工作原理為分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。本文介紹的是日立U-3010型號紫外分光光度計的使用方法。日立U-3010型號紫外分光光度計的使用1.開電源,先開U-3010電源,再啟動電腦2.點擊桌面上UV,啟動程序3.點擊method窗口,將會出現(xiàn)GeneralQuantitationinstrumentMonitorReport五個對話框,如下圖所示:4.設(shè)置(1)General對話框;(2)Quantitation對話框,如果測波長選擇wavelength,數(shù)量可選多個,比如測定:260nm,280nm,230nm,則選擇3個;如圖所示:(3)Instrument對話框,將你要測定的波長值依次輸入框內(nèi);(4)設(shè)置好后,點確定鍵5.放入空白對照。在測定時,紫外可見分光光度計受到強電磁場干擾,應(yīng)去除無線電干擾環(huán)境后,再次測量。廣西原子吸收分光光度計原理
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管。海南紫外可見分光分光光度計原理每天使用可見分光光度計結(jié)束后,應(yīng)仔細檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出,若有溢出必須隨時用濾紙吸干。
UV-5500(PC)型紫外可見分光光度計儀器特點和功能◆雙光束比例監(jiān)測光學(xué)系統(tǒng)◆儀器采用128*64位點陣式液晶顯示器,每屏可顯示多組數(shù)據(jù)◆能直接建立標準曲線,并可用標準曲線進行相關(guān)的測試◆可連續(xù)測試和存儲200組數(shù)據(jù),并可存儲200條標準曲線,用戶可根據(jù)編號方便調(diào)用,測試數(shù)據(jù)可斷電保持◆波長自動校準、自動設(shè)定、偏差自我修復(fù)◆換燈免光學(xué)調(diào)試◆UV-5500PC型標配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測量、定量測試、定性測試、動力學(xué)測試、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試及數(shù)據(jù)圖譜的處理儀器指標波長范圍190-1100nm光譜帶寬2nm雜散光≤◆UV-5500PC型標配元析公司的掃描軟件可直接完成光度測量、定量測試、定性測試、動力學(xué)測試、多波長測試、DNA/蛋白質(zhì)測試及數(shù)據(jù)圖譜的處理。
雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標。使用與維護1、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。2、指針式儀器在未接通電源時,電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進行機械調(diào)零。3、比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。
在測量準確性和精確度時,將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi)。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較。在檢查波長時,測定三個測試濾光片在對應(yīng)波長(260nm、280nm和800nm)下的吸光度,以確定每個波長的變異系數(shù)。許多分光光度計,包括Eppendorf的所有儀器,都帶有一個特殊的功能——自檢。Eppendorf建議用戶至少每周運行一次自檢,但自動自檢的頻率可根據(jù)需要進行設(shè)定。自檢主要檢查儀器的幾個部分。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機誤差來校驗檢測器,通過檢查大能量、隨機誤差、基準傳感器的信號和光強度來校驗光源。因為分光光度計涉及到光學(xué)、電學(xué)和結(jié)構(gòu)等,所以它需要在一定的環(huán)境中應(yīng)用。遼寧分光分光光度計原理
紫外分光光度計的檢測器利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號。廣西原子吸收分光光度計原理
在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即,為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。廣西原子吸收分光光度計原理