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HE染色樣本組織固定與切片:首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟,將待包埋的組織樣本放入石蠟中,確保組織位置規(guī)整。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后,進(jìn)行降溫冷凍,使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果,然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片,厚度在4-8um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。組織樣本脫蠟:將待測(cè)組織樣本切片放于二甲苯中,充分浸泡10min,浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min,目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解,這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候,染液可以充分進(jìn)入組織種,同時(shí),二甲苯還可以起到透明的作用,使切片更容易觀察。HE染色原理 試劑 染色步驟 注意事項(xiàng) 。甘肅結(jié)果客觀的HE染色報(bào)告
HE染色常見(jiàn)問(wèn)題:Q3:細(xì)胞核染色過(guò)淺,顏色暗淡答:切片在蘇木素染液中停留過(guò)短,或蘇木素過(guò)度氧化失效,或分化時(shí)間太長(zhǎng)。對(duì)策:重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液,每個(gè)3-5min即可,接著重新染色??梢赃m當(dāng)?shù)亟M織的嗜堿性以增強(qiáng)核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,自來(lái)水沖洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,自來(lái)水沖洗10min染色。Q4:細(xì)胞核染色過(guò)深,胞漿著藍(lán)色答:切片在蘇木素染液中停留過(guò)長(zhǎng);或切片太厚;或分化時(shí)間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細(xì)胞核),要么重新染色,要么重新制片。南京英瀚斯,專(zhuān)業(yè)的病理染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)平臺(tái)。天津病理HE染色公司HE染色注意事項(xiàng)以及常規(guī)的流程解析。
HE染色構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)很多,它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時(shí),則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時(shí),原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。
HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織解離,分化不可過(guò)度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱(chēng)藍(lán)化作用,一般多用自來(lái)水浸洗即可變藍(lán),也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán)。南京英瀚斯,專(zhuān)業(yè)的技術(shù)提供專(zhuān)業(yè)的HE染色服務(wù)。
HE 染色是病理的主要常規(guī)染色,其命名是因?yàn)橹饕褂玫膬煞N試劑分別為Hematoxylin與Eosin Y,藉由電荷與吸附性的差異,組織結(jié)構(gòu)對(duì)不同染料的結(jié)合程度不同,我們可以發(fā)現(xiàn)Hematoxylin呈色在細(xì)胞核,Eosin Y則表現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)與間質(zhì),染色優(yōu)良的片子可以幫助我們?cè)陲@微鏡下看到清晰的細(xì)胞型態(tài)與變化。染色步驟依試劑提供者的建議而有所差異,而且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室需要的顏色深淺不一,使用者可以依自己的需求另行調(diào)整,以下是力沛有限公司建議的HE染色步驟科研常備實(shí)驗(yàn)操作之HE染色。青海質(zhì)量好的HE染色哪家好
HE染色取材、染色以及分析方法介紹。甘肅結(jié)果客觀的HE染色報(bào)告
HE染色:在組織病理學(xué)中,蘇木素-伊紅染色是一種日常使用比較普遍的常規(guī)染色方法。常規(guī)蘇木素染色的對(duì)比染色是用伊紅,也有采用焰紅,因?yàn)檠婕t比伊紅色澤更鮮明,還有采用橘黃G,比布里希猩紅,波爾多紅等作為對(duì)比染色。伊紅是比較常用的胞質(zhì)染料,本身溶于醇而不溶于水,為磚紅色粉末狀或醬紅色結(jié)晶。配方:伊紅Y(水溶)0.5-1g,蒸餾水99ml。如果取用伊紅Y(醇溶性)應(yīng)當(dāng)溶于99ml 75%或95%的乙醇中。如果在伊紅液中加入0.5ml冰醋酸,可以加速其染色過(guò)程,使得胞質(zhì)的色澤更加艷麗。結(jié)果是細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì)、肌肉、結(jié)締組織、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。甘肅結(jié)果客觀的HE染色報(bào)告
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