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來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-03-10

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在保持組蛋白和DNA聯(lián)合的同時(shí),染色質(zhì)被切成很小的片斷,通過運(yùn)用對應(yīng)于一個(gè)特定組蛋白標(biāo)記的生物抗體,將目標(biāo)片段(組蛋白發(fā)生特異標(biāo)記的片段)沉淀下來。ChIP是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“protein A”特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的Fc片段的現(xiàn)象合用開發(fā)出來的方法(免疫磁珠結(jié)合proteinA,proteinA結(jié)合抗體Fc段,抗體結(jié)合抗原即發(fā)生特異標(biāo)記的組蛋白,這里要注意組蛋白是和DNA結(jié)合的,這樣就把目標(biāo)組蛋白和DNA的復(fù)合體沉淀下來了)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包再將組蛋白與DNA分離,用獲得的DNA去做PCR分析和序列測定等檢測技術(shù),從而進(jìn)一步檢測哪些基因的組蛋白發(fā)生了修飾。

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因?yàn)镽IP做完得到的是RNA序列,要做后續(xù)檢測,比如測序、判斷目標(biāo)序列位置等,是不是都必須要做RT-PCR,得到逆轉(zhuǎn)錄的DNA后,后面就跟ChIP相同了?細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包。常見的用realtimeqRT-PCR。如果對照的目的是保證兩個(gè)樣品間加入的細(xì)胞量一致或者進(jìn)行定量,理論上說,使用input作為判別,計(jì)算不同樣品上樣量的差異。如果對照的目的是為了看IgG以及目的抗體富集的非特異性mRNA的量的話,那么可以找一個(gè)確定不會(huì)與目的抗體結(jié)合的RN**段設(shè)計(jì)primer進(jìn)行qPCR,用來看IgG以及目的抗體拉下來的背景情況。RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術(shù)的類似應(yīng)用,但由于研究對象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA-蛋白復(fù)合物,RIP實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件與ChIP實(shí)驗(yàn)不太相同(如復(fù)合物不需要固定,RIP反應(yīng)體系中的試劑和抗體相對不能含有RNA酶,抗體需經(jīng)RIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證等等)江蘇真實(shí)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

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