外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取比較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實驗。五是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度比較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法比較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體外泌體(exosome)研究-英瀚斯生物。浙江哪家做外泌體電鏡

外泌體鑒定，可以用和表面抗原對應(yīng)的抗體進(jìn)行免疫印跡（WB）、透射電子顯微鏡（TEM）、納米粒徑分析（如NanoSight LM10）等來驗證。前面也說了，ISEV建議用表面蛋白來界定所提取的細(xì)胞外囊泡，所以用CD63來做WB或ELISA是必不可少的了。使用Wako的PS Capture? Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP)（產(chǎn)品編號298-80601），既能鑒定外泌體的CD63信號，又能進(jìn)行定量、定性分析，一舉兩得！南京英瀚斯可以做外泌體鑒定。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢，表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成，使其可以穿透許多生物膜，江西外泌體多少錢揭開外泌體神秘面紗，南京英瀚斯生物。

外泌體在國家自然科學(xué)基金立項集中的領(lǐng)域還是**學(xué) ，近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在**的形成，耐藥性，檢測等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在Molecular Cancer （IF=10.679）上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動態(tài)平衡。發(fā)表在Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF=5.646）上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章則研究了腹腔灌洗液中細(xì)胞外囊泡相關(guān)的miRNA作為子宮內(nèi)膜ai分子標(biāo)志物的可能性。此外，在神經(jīng)系統(tǒng)和精神疾病，中醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域也有不少外泌體相關(guān)項目中標(biāo)。

外泌體研究界比較家喻戶曉的就是大牛Thery C了，想當(dāng)年一篇外泌體超速離心提取方法的文章已經(jīng)是成為了眾多外泌體研究者的“圣經(jīng)”了（Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids，2006）。據(jù)不完全統(tǒng)計，大牛Thery C實驗室已發(fā)表外泌體相關(guān)paper四五十篇，其中大多數(shù)為綜述性文章，實驗性文章有約12篇。英瀚斯生物，多年從事科研課題實驗服務(wù)工作，經(jīng)常設(shè)計外泌體相關(guān)實驗檢測項目，各類外泌體測序、檢測、電鏡等外泌體提取，實驗經(jīng)驗豐富。

外泌體的產(chǎn)生過程為：細(xì)胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB），比較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細(xì)胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體比較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome。對于外泌體的作用，當(dāng)時推測為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+細(xì)胞的抗**反應(yīng)。2007年HValadi等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、**生長于侵襲等各種生物過程中。南京實驗醫(yī)學(xué)平臺一站式外泌體檢測服務(wù)平臺。浙江哪家做外泌體電鏡

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外泌體的生物學(xué)功能取決于起源細(xì)胞和起源組織或細(xì)胞在外泌體產(chǎn)生時的狀態(tài)。先前的研究表明，外泌體可能像細(xì)胞垃圾袋一樣，排出多余和/或無功能的細(xì)胞成分。此外，內(nèi)吞囊泡還參與細(xì)胞表面蛋白和信號分子的循環(huán)。**近的研究表明,外泌體在不同的生物過程扮演重要的角色, 如血管生成、抗原表達(dá)、細(xì)胞凋亡、凝固、細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài),炎癥和細(xì)胞間信號。這些角色歸因于能力轉(zhuǎn)移核糖核酸,蛋白質(zhì),酶和脂質(zhì),從而影響生理和病理過程的各種疾病,包括**、神經(jīng)退行性疾病、***和自身免疫性疾病。浙江哪家做外泌體電鏡

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