礦用低壓接線盒:礦井安全的守護(hù)者
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免疫組化有哪幾種分類 ?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
英瀚斯生物病理染色效果好,效率高。
3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 免疫組化結(jié)果怎么看?新疆靠譜免疫組化怎么選擇
確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對(duì)于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源,進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。江蘇病理免疫組化價(jià)格病理免疫組化多少錢?
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
做病理染色,就找英瀚斯,專業(yè)團(tuán)隊(duì)支持。
(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長(zhǎng)二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。
英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟
1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,用PBS沖洗三次,每次5min。
2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),中火至沸后斷電,間隔10min低火至沸。
3、自然冷卻后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
6、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。
7、PBS洗3次,每次5min。
8、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。
9、PBS洗3次,每次5min。
10、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
11、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
12、切片經(jīng)過梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 哪里可以做免疫組化?
細(xì)胞爬片免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟
1、選擇貼壁良好的細(xì)胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
5、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。
6、PBS洗3次,每次5min。
英瀚斯生物,細(xì)胞、動(dòng)物、臨床樣本免疫組化檢測(cè)都可完成!
7、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。
8、PBS洗3次,每次5min。
9、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
10、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
11、切片經(jīng)過梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)?青海病理免疫組化外包
免疫組化IHC詳細(xì)介紹!新疆靠譜免疫組化怎么選擇
免疫組化指的是根據(jù)抗體與抗原特異結(jié)合的原理來檢測(cè)組織切片中的抗原(如蛋白)。immuno的詞根來自操作中所使用的抗體,而histo意味著組織。另一種類似的技術(shù)是免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry,簡(jiǎn)稱ICC)。這兩個(gè)詞大家經(jīng)?;熘?,看著好像差不多,但實(shí)際上還是有點(diǎn)區(qū)別。IHCvsICC對(duì)于IHC,組織是來自患者或動(dòng)物,經(jīng)過冷凍或石蠟包埋。將這些組織制成約4μm厚的切片,封片后再處理。通過這種方法,研究人員可觀察細(xì)胞組分的定位,同時(shí)維持周圍組織的原先結(jié)構(gòu)。對(duì)于ICC,大部分細(xì)胞外基質(zhì)及其他基質(zhì)組分被去除,只剩下整個(gè)細(xì)胞來染色。ICC的來源可以是細(xì)胞懸液,來自患者或動(dòng)物(如血涂片、拭子等),或在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的組織培養(yǎng)細(xì)胞系。 新疆靠譜免疫組化怎么選擇