免疫組化分類中，免疫熒光方法，英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南！云南切片免疫組化價(jià)格

免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水，如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會(huì)引起染色不均勻、陽性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強(qiáng)，脫蠟時(shí)間較短； 

（2）脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮，則脫蠟時(shí)間不需很多，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時(shí)間需要延長，10-20分鐘或更長。

（3）當(dāng)天切的切片，燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色，切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過程，如果預(yù)先切好烤好的切片，在染色前，還必須對切片進(jìn)行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好?？傊?，操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié)，不同的室溫，不同的試劑來決定，脫蠟的時(shí)間，原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。

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醫(yī)療和預(yù)后有關(guān)的免疫組化。與醫(yī)療及預(yù)后有關(guān)的標(biāo)記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標(biāo)記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的過表達(dá)與cancer的擴(kuò)散、分化、術(shù)后殘存cancer灶呈正相關(guān);乳腺cancer中表達(dá)C-erbB2的浸潤性cancer患者預(yù)后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達(dá)增高，PTEN基因表達(dá)減弱，提示cancer預(yù)后不良。(2)細(xì)胞增殖性標(biāo)記物:cancer細(xì)胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫(yī)療與預(yù)后，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細(xì)胞的增生做出評價(jià)，表達(dá)指數(shù)越高，表明其增殖指數(shù)越活躍，惡性度增高，預(yù)后不良，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67、EGFR陽性者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，并與ji素受體的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等，應(yīng)用更為范圍廣的的是子宮內(nèi)膜cancer及乳腺cancer，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測，有助于決定臨床醫(yī)療中是否需要加入內(nèi)分泌ji素阻斷醫(yī)療，并能判斷預(yù)后，ER及PR陽性表達(dá)、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達(dá)病例對三苯氧胺等ji素醫(yī)療反應(yīng)良好，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。

免疫組化的DAB顯色時(shí)間如何把握？

1、DAB顯色時(shí)間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)淺棕色本底時(shí)即可沖洗；

2、DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間；

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3、此外，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時(shí)間；

4、DAB顯色時(shí)間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時(shí)間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時(shí)間過長。 免疫組化方法步驟是什么？

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色； 

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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等； 

（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要； 

（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。 免疫組化樣本如何處理？湖北大鼠免疫組化注意事項(xiàng)

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確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位，臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤，用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源，進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。云南切片免疫組化價(jià)格