密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應(yīng)用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內(nèi)體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當(dāng)施加離心力時，樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集，密度梯度超速離心對從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣、費(fèi)時且會造成外泌體損失。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測腫細(xì)胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。外泌體是粉色的還是透明的

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。浙江CD9外泌體慢病毒超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進(jìn)行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。

外泌體的臨床應(yīng)用：間充質(zhì)干細(xì)胞是目前較普遍使用的細(xì)胞類型，它具有自我更新，多向分化、分泌細(xì)胞因子和細(xì)胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點(diǎn)，在臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體與間充質(zhì)干細(xì)胞有著相似的功能，包括修復(fù)與再生組織、阻止炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，但外泌體相對于間充質(zhì)干細(xì)胞又有許多優(yōu)勢。首先，間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次，它們沒有活細(xì)胞，不會像間充質(zhì)干細(xì)胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導(dǎo)致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控問題，間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細(xì)胞的趨勢。干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。膜受體的識別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍。

質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成，多泡體可與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡和細(xì)胞器交叉，從而增加了外泌體成分的多樣性。根據(jù)細(xì)胞來源的不同，細(xì)胞外囊泡，包括外泌體，可以包含細(xì)胞的許多成分，包括DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物、胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚，需要進(jìn)一步研究。一個推測的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細(xì)胞成分的功能、靶向、機(jī)制驅(qū)動的積累，提示它們在調(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障（如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力。河南海洋生物外泌體

外泌體具有相似布朗運(yùn)動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體是粉色的還是透明的

當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了肉瘤的生長與侵襲。外泌體是粉色的還是透明的

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