外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。吉林外泌體Dil
尺寸排阻色譜法(SEC)根據(jù)大小來分離樣本。該技術(shù)應(yīng)用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱,該聚合物珠包含多個孔和通道,分子根據(jù)其直徑穿過。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間,而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子。與離心分離方法相比,SEC分離的外泌體不受剪切力的影響,剪切力可能會改變囊泡的結(jié)構(gòu)。此方法分離到的外泌體純度較高,在電鏡下大小均一,但是獲取量少,所需設(shè)備特殊。此外,SEC方法與超濾相結(jié)合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析。干細(xì)胞提取試劑盒公司干細(xì)胞外泌體攝取流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法。
外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體,可由機體內(nèi)多種細(xì)胞如免疫細(xì)胞、干細(xì)胞、心血管細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血小板、神經(jīng)細(xì)胞和肉瘤細(xì)胞等主動分泌產(chǎn)生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo),另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。
外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30–150nm),由所有體外和體內(nèi)細(xì)胞持續(xù)分泌。由于人體內(nèi)復(fù)雜的功能,包括細(xì)胞間通訊和信號轉(zhuǎn)導(dǎo),外泌體正在改變研究。這些細(xì)胞外囊泡正在生長,這既是為了了解其生物學(xué)功能,也是為了將其用于實際應(yīng)用,如無創(chuàng)診斷和高級調(diào)理開發(fā)。Dynabeads提供一系列外泌體分離產(chǎn)品和工具,用于表征和分析其RNA和蛋白質(zhì)含量,以及體外和體內(nèi)追蹤,以幫助您進一步了解這些迷人的外泌體。超速離心方案可能冗長乏味且耗時的。您可使用靈活且可擴展的總外泌體分離試劑從細(xì)胞培養(yǎng)基或任何體液中即刻分離完整的外泌體。這些試劑及其隨附的方案是多種試驗的理想選擇,包括處理少量樣本和處理多個樣本。外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml。
為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀?答:這種問題通常有三種可能性,其一:使用的細(xì)胞上清或者血清量太低,從而造成了這樣的結(jié)果。其二:使用了不透明的超速離心管,一般來說外泌體產(chǎn)量都比較小,所以凡是不透明的管子,基本都是比較難見到明顯沉淀的,可以當(dāng)做有沉淀,然后操作下去即可。其三:使用了角轉(zhuǎn)。部分品牌離心機的角轉(zhuǎn)管壁粘附性比較低,超離結(jié)束沒多久沉淀就會滑落下去,所以請在離心結(jié)束時趕緊去收樣。外泌體的角色:1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細(xì)胞攝入外泌體:外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用,活躍細(xì)胞內(nèi)通路。2、外泌體的角色之一:細(xì)胞-細(xì)胞通訊,比如抗原遞呈。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體研究
對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預(yù)后分析。吉林外泌體Dil
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時,量少。吉林外泌體Dil
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