NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。河南唾液外泌體

外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。外泌體發(fā)揮功能：將細胞或組織中多余的或者有害的分子排除，這為研究生物標志物提供了可能。乳液提取試劑盒公司NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一。

根據(jù)內(nèi)侵量的不同，可以產(chǎn)生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產(chǎn)生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合，較終其內(nèi)容物在溶酶體中降解。降解產(chǎn)物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過細胞骨架和微管網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運至質(zhì)膜，借助mvb-?？康鞍淄？吭谫|(zhì)膜的腔側(cè)。隨后胞吐導(dǎo)致具有與質(zhì)膜相似的脂質(zhì)雙分子層方向的外泌體的釋放。有幾種蛋白參與了外泌體的生物發(fā)生，包括RabGTPases、ESCRT蛋白，以及其他也被用作外泌體標記的蛋白(CD9、CD81、CD63、flotillin、TSG101、神經(jīng)酰胺和Alix)。

當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后，其被認為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進了肉瘤的生長與侵襲。采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為診療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究，應(yīng)選用血漿還是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液體，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子，以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細胞。組織外泌體lncRNA測序

提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。河南唾液外泌體

外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細胞外成分，如蛋白質(zhì)、脂類、代謝物、小分子和離子，可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷，與細胞表面蛋白一起進入細胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合，這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達它們的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。河南唾液外泌體

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