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外泌體研究套路

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-04-10

外泌體的提取分離方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取:近幾年來,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。外泌體研究套路

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酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液(已知外泌體的量)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),甚至可以進(jìn)行定量。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。唾液提取試劑盒分類外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

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流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準(zhǔn)確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,可用流式細(xì)胞儀檢測到陽性表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測時(shí)需要單顆粒懸浮液,當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。因此,為了通過流式細(xì)胞儀觀察,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細(xì)胞術(shù)之前,可以在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號,不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析,還可以基于抗原表達(dá)對外泌體進(jìn)行定量或分類。

外泌體的相關(guān)成分:1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣,是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流動(dòng),參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同時(shí)還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的:如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列(GGAG/CCCU),進(jìn)行主動(dòng)包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體實(shí)際應(yīng)用之前,需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn)。

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當(dāng)外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了肉瘤的生長與侵襲。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合。外泌體

1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。外泌體研究套路

從世界范圍來看,美、歐、日等發(fā)達(dá)地區(qū)的銷售產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷史悠久,無論是銷售產(chǎn)品制造業(yè)還是銷售服務(wù)業(yè),都處于全球優(yōu)先地位。而泰國、印度等東南亞及南亞地區(qū),銷售產(chǎn)業(yè)雖然起步晚,但是發(fā)展較快,已成為經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展重要組成部分。如行家預(yù)判,生產(chǎn)型發(fā)展即將步入黃金時(shí)代,眾多企業(yè)圍繞醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、商業(yè)領(lǐng)域及新興的互聯(lián)網(wǎng)醫(yī)藥等領(lǐng)域正在進(jìn)行廝殺。在我國政策的支持下,在社會資本的推動(dòng)下以及技術(shù)升級的帶動(dòng)下,互聯(lián)網(wǎng)巨頭、科技巨頭、地產(chǎn)巨頭等企業(yè)紛紛跨界進(jìn)入生產(chǎn)型。一體化的結(jié)構(gòu)體系難以形成,我國醫(yī)藥健康正處于初級發(fā)展階段,與體系健全的發(fā)達(dá)地區(qū)相比,冷鏈物流行業(yè)呈現(xiàn)規(guī)模小且分布雜亂的現(xiàn)象。醫(yī)藥行業(yè)上下游未整體規(guī)劃,成為我國冷鏈物流發(fā)展的障礙,從而使得醫(yī)藥冷鏈物流流通效率低下。以外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取為例,主打運(yùn)動(dòng)健康A(chǔ)PP停留在工具層面,缺少完整的消費(fèi)場景閉環(huán),較強(qiáng)的工具屬性停留在實(shí)現(xiàn)用戶**基礎(chǔ)的功能需求,并未涉及足夠高的用戶使用價(jià)值實(shí)現(xiàn),同時(shí)缺乏數(shù)字化運(yùn)營的效能也是運(yùn)動(dòng)健康A(chǔ)PP發(fā)展的明顯桎梏,經(jīng)營模式有待進(jìn)一步探索。外泌體研究套路

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