當外泌體在1980年初次被發(fā)現(xiàn)后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了肉瘤的生長與侵襲。外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。海洋生物外泌體miRNA芯片
肉瘤細胞可以通過產生異常的抗肉瘤或肉瘤免疫應答并促進瘤子細胞的活動而大量產生外泌體,這些外泌體富含促病的細胞成分,例如PD-L1、mRNA和micro-RNA等免疫阻止蛋白,參與病癥的發(fā)展、轉移和耐藥性。值得注意的是,肉瘤分泌的外泌體表面和外泌體顆粒中均存在的PD-L1。ESCRT(運輸所需的內體分選復合體)參與將生物分子包裝到外泌體中,nSMase2(中性鞘磷脂酶2)和Rab蛋白調節(jié)外泌體分泌。已確定ESCRT、Rab27a和nSMase2參與外泌體PD-L1的包裝和分泌。外泌體可以將PD-L1轉運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞,并可能與PD-1結合。腹膜透析液外泌體測序外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。
外泌體的臨床應用:間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié)、來源普遍等特點,在流感病毒的臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫,但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢。首先,間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定,更好保存,易于管理和控制,可以人為改變其內容物的種類和數量。其次,它們沒有活細胞,不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重;另外,它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題,間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。
質膜的連續(xù)內陷較終導致多泡體的形成,多泡體可與細胞內的其他囊泡和細胞器交叉,從而增加了外泌體成分的多樣性。根據細胞來源的不同,細胞外囊泡,包括外泌體,可以包含細胞的許多成分,包括DNA、RNA、脂質、代謝物、胞質和細胞表面蛋白。目前產生外泌體的生理目的尚不清楚,需要進一步研究。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細胞成分的功能、靶向、機制驅動的積累,提示它們在調節(jié)細胞間通訊中發(fā)揮作用。超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。
外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。外泌體實際應用之前,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。b-actin和外泌體
外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經退行性疾病的發(fā)病機理。海洋生物外泌體miRNA芯片
免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原,然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。海洋生物外泌體miRNA芯片
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