為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS（MagCapture?ExosomeIsolationKitPS）提取高純度細(xì)胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì)，眾所周知磷脂酰絲氨酸（PS）在活細(xì)胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，暴露在外泌體膜外側(cè)3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通過巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體）蛋白通過細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4）?；谏鲜鲋R，我們利用Tim4固化磁珠，在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體，再添加螯合劑洗脫外泌體，這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā)，并取得了成功。5）這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對性的調(diào)整。外泌體標(biāo)志物

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運(yùn)融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流動，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體標(biāo)志物外泌體在心臟修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用，并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸，例如miRNA和環(huán)狀RNA。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。3、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達(dá)基底層起效。

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或示蹤，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前對于外泌體的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用，并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。提取試劑盒廠家

外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程。外泌體標(biāo)志物

外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細(xì)胞的增殖、再生和遷移等生理過程，在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用，如肝病、肝硬化、肝纖維化、酒精性脂肪肝等。抑制或阻止外泌體的分泌，或許是治理肝臟疾病的一種新型策略。此外，外泌體具有穩(wěn)定性和生物安全性，也可以用作載體攜帶改造的基因或藥物，或用作疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)殺死瘤細(xì)胞。外泌體會起到一定的保護(hù)作用，抵抗病毒的作用。與HCV類似，HBV患者的血清中分離到的外泌體同樣攜帶HBV核酸分子和蛋白質(zhì)。HBV陽性的外泌體會主動轉(zhuǎn)移HBV到肝細(xì)胞中。外泌體中HBV核酸分子還會抑制RIG-1和下游信號通路，導(dǎo)致NK細(xì)胞功能紊亂。外泌體標(biāo)志物

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