外泌體是細(xì)胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導(dǎo)細(xì)胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細(xì)胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細(xì)胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細(xì)胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞內(nèi),從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細(xì)胞;(3)外泌體還可以與靶細(xì)胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞,從而引起靶細(xì)胞的響應(yīng)。通過介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞或髓樣細(xì)胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細(xì)胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進(jìn)中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長和中流細(xì)胞遷移。外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。浙江外泌體lncRNA芯片

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或示蹤，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前對于外泌體的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。外泌體純化方法有哪些外泌體的提取的方式：免疫磁珠法。

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，甚至可以進(jìn)行定量。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。

外泌體的提取分離方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。

外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。細(xì)胞通過內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡，小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體（earlyendosome），在多個(gè)蛋白的協(xié)同調(diào)控下，早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個(gè)腔內(nèi)小囊泡的多泡體（multivesicularbodies，MVB），這個(gè)過程中這些腔內(nèi)小囊泡（intraluminalvesicles，ILVs）會裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子，泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細(xì)胞膜融合。隨后，這些小囊泡會被釋放到細(xì)胞外，稱為外泌體。外泌體是通過細(xì)胞內(nèi)吞細(xì)胞膜融合主動排除的物質(zhì)，大小均勻，而微泡是由細(xì)胞直接出芽脫落生成，大小不均一。外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體。外泌體純化方法有哪些

外泌體觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。浙江外泌體lncRNA芯片

細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號或融合，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。浙江外泌體lncRNA芯片

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