人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而活躍靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而活躍細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。泌體是細胞內源性的小囊泡,由大多數細胞分泌。血漿外泌體提取試劑盒步驟
密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。尿液提取試劑盒生產廠家外泌體的提取的方式:密度梯度離心法。
已經有許多關于外泌體作用的報導,根據這些現象實驗中,從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機制,通過促進或壓制釋放機制,分析會引起何種生理作用,這是進一步研究的發(fā)展方向。甚至活內的外泌體動態(tài)(哪個外泌體遷移至何處)也會成為今后需要努力研究的重要課題。實際上,用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體,其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較,PS親和法提取的外泌體,其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上,幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重復性好。
Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養(yǎng),發(fā)現裝載紫杉醇的間充質細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性,采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產生外泌體作為藥物載體。同時為實現外泌體運輸的靶向性,使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b,溶酶體相關膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法,在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織,抑制中流生長且無明顯毒性。應用Tim4的外泌體強結合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。
外泌體在各種疾病的診斷和治理中的應用研究火熱。外泌體的復雜性,為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。此外,能夠向病變細胞輸送功能性物質的特性使外泌體有潛力作為基因和藥物遞送的載體。有研究總結了從外泌體中篩選的生物標志物,可用于疾病的診斷、預后及治理。外泌體在生物液體中寬泛分布,包括血液、尿液、唾液、胸腹水、腦脊液、膽汁、乳汁以及淚液等,其復雜的內容物被認為是疾病診斷的無創(chuàng)或微創(chuàng)生物標志物,具有檢測包括病癥在內的許多病理狀況的潛力,可以用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。外泌體可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化等方方面面。吉林外泌體lncRNA測序
外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (30-150nm)。血漿外泌體提取試劑盒步驟
Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發(fā)現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。2015年,隨著精確醫(yī)學概念的提出,越來越多的人開始關注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個新型的研究熱點,由于它在體內存在的普遍性和獲取的便捷性,已經成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,在精確醫(yī)學發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式:超速離心法。血漿外泌體提取試劑盒步驟
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