外泌體的臨床應用：間充質(zhì)干細胞是目前較普遍使用的細胞類型，它具有自我更新，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調(diào)節(jié)、來源普遍等特點，在臨床診療中取得了良好的成果。間充質(zhì)干細胞來源外泌體與間充質(zhì)干細胞有著相似的功能，包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調(diào)節(jié)機體免疫，但外泌體相對于間充質(zhì)干細胞又有許多優(yōu)勢。首先，間充質(zhì)干細胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內(nèi)容物的種類和數(shù)量。其次，它們沒有活細胞，不會像間充質(zhì)干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對間充質(zhì)干細胞的調(diào)控問題，間充質(zhì)干細胞來源外泌體有代替間充質(zhì)干細胞的趨勢。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。外泌體的形成始于細胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。黑龍江外泌體NTA

尋找肝臟疾病的新型分子標志物一直是研究熱點，也是難點。不同肝臟疾病中，細胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。這些不同生理狀態(tài)下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等，是潛在的分子診斷和預后標志物。肝細胞患者中，血清外泌體miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明顯上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明顯下降。而HCC患者肝移植復發(fā)后，血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外，微泡也有可能作為新型標志物，研究發(fā)現(xiàn)HCV患病者中CD4+和CD8+T細胞來源的微泡含量上升；而肝臟干細胞分泌的微泡中多種miRNAs上調(diào)。細菌外泌體提取試劑盒步驟多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。

瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環(huán)境中去，同時，外泌體能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更長時間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術的進步，已經(jīng)有生物公司嘗試涉足外泌體領域，外泌體中存在黑色素瘤標志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關蛋白，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者，通過檢測MIA和S100B表達水平對黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質(zhì)上說，液態(tài)活檢是分子診斷在樣本來源上的延伸，進一步豐富了檢測手段，而隨著外泌體的不斷揭秘，相信其會在液態(tài)活檢中發(fā)揮越來越重要的作用。

血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導致的。–80°C保存被公認是保存各種生物標本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護劑,海藻糖可以提供生物保護作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細胞外囊泡的損失等。結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。

PEG沉淀法分離外泌體：通常通過將無水聚合物，如聚乙二醇（PEG），與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結(jié)合水分子，增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力從而沉淀外泌體，然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速，簡便，可用于各種起始體積（從100μL到幾毫升）適合于各種研究和臨床設定。然而，這種方法缺乏選擇性，PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀，還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)聚集體沉淀。因此，在使用這種方法之前，必須進行樣品預處理，例如過濾或超速離心，以減少較終的外泌體制劑的污染。干細胞外泌體可以有效活化提高細胞能量加速細胞排毒、淡化色斑。海洋生物外泌體示蹤

外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記。黑龍江外泌體NTA

外泌體的形成始于細胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。細胞通過內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡，小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體（earlyendosome），在多個蛋白的協(xié)同調(diào)控下，早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個腔內(nèi)小囊泡的多泡體（multivesicularbodies，MVB），這個過程中這些腔內(nèi)小囊泡（intraluminalvesicles，ILVs）會裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子，泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細胞膜融合。隨后，這些小囊泡會被釋放到細胞外，稱為外泌體。外泌體是通過細胞內(nèi)吞細胞膜融合主動排除的物質(zhì)，大小均勻，而微泡是由細胞直接出芽脫落生成，大小不均一。黑龍江外泌體NTA

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