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腹水提取試劑盒服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-05-21

為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,可以通過(guò)電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征。通過(guò)電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,不同類(lèi)型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同,得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如,在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形,可能由于樣品在固定或染色過(guò)程中極度脫水,導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反,在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形,由于不會(huì)脫水變性,所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外,由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。腹水提取試劑盒服務(wù)

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外泌體含有的信號(hào)分子能反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會(huì)包含細(xì)胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源。瘤細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)對(duì)大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞調(diào)節(jié)臨近或遠(yuǎn)處瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境,對(duì)促瘤生成及瘤增生、轉(zhuǎn)移發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。瘤細(xì)胞分泌的外泌體還可以通過(guò)誘導(dǎo)耐藥和免疫抑制來(lái)促進(jìn)瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間,這些特點(diǎn)使得外泌體可應(yīng)用于瘤的早期診斷和預(yù)后判斷。靶向瘤的外泌體的標(biāo)志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標(biāo)和途徑,對(duì)高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。海洋生物外泌體芯片外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。

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磁珠免疫法分離外泌體:將針對(duì)目的抗原的抗體通過(guò)生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來(lái)捕獲外泌體,從而提高了分離效率。此外,使用磁珠時(shí),樣品起始體積沒(méi)有上限,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí),磁珠法可分離出更純凈的外泌體,特異性高、速度更快,并且不需要昂貴的儀器。另外,與其他分離方法(如超速離心或超濾)相比,磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí),外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。

事實(shí)上,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明:在小鼠急性心肌梗塞術(shù)后,注射來(lái)源于間充質(zhì)干細(xì)胞、心臟祖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或心肌源性細(xì)胞的外泌體均可改善心臟功能,減輕心臟纖維化,刺激血管生成。例如,心源性細(xì)胞外泌體能通過(guò)特異性的巨噬細(xì)胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護(hù)作用。心臟再灌注后,CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積,而且CDCexo會(huì)減少梗死組織內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞數(shù)量,并改變巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)。自體CD34+干細(xì)胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能,并降低嚴(yán)重肢體缺血患者的截肢率。其作用機(jī)制在于:CD34+干細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可以作為心肌修復(fù)的潛在無(wú)細(xì)胞治理劑,但是,目前將外泌體完全用作心臟修復(fù)治理劑之前還是有很多重點(diǎn)問(wèn)題需要解決。蛋白質(zhì)分子在外泌體信號(hào)傳遞過(guò)程中起到了非常重要的作用。

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外泌體的提取方法:超速離心法,這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過(guò)濾離心法,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不會(huì)影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期的準(zhǔn)備工作繁雜,比較耗時(shí),量少。外泌體的提取的方式:免疫磁珠法。細(xì)胞上清外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。腹水提取試劑盒服務(wù)

微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測(cè)平臺(tái),這些方法包括免疫親和分離、膜過(guò)濾、納米線捕獲、聲納米過(guò)濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡(luò)組成的緊湊單元,能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品;且根據(jù)特定的功能,微通道可以相互連接,使用額外的特定裝置來(lái)微調(diào)流體運(yùn)動(dòng)。微流控技術(shù)能夠以極高的準(zhǔn)確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實(shí)驗(yàn)室過(guò)程,取代昂貴的設(shè)備,基于微流控技術(shù)的電化學(xué)外泌體檢測(cè)芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。腹水提取試劑盒服務(wù)

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