細(xì)胞分泌外泌體的過(guò)程一般分為三個(gè)階段:(1)質(zhì)膜內(nèi)陷,形成早期內(nèi)吞小泡;(2)內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內(nèi)容物,形成外泌體。外泌體具有獨(dú)特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成,另有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的部分特殊脂類(lèi)。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來(lái)源外泌體所共有,只有小部分與其來(lái)源有關(guān),為其分泌細(xì)胞的特有蛋白,能夠反映分泌細(xì)胞的類(lèi)型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞,發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體。吉林外泌體tmt

Buller等利用miR-146b的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，使其分泌的外泌體負(fù)載miR-146b，并將外泌體注射至移植到小鼠體內(nèi)的GBM處。結(jié)果表明，這種利用外泌體運(yùn)輸miRNA進(jìn)行zhiliao的方法可以有效抑制中流的生長(zhǎng)。對(duì)于GBM類(lèi)腦部中流，體內(nèi)zhiliao不同于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，更需考慮腦部組織微環(huán)境對(duì)藥物的影響，外泌體可運(yùn)輸miRNA并不破壞其在腦部中流組織處的原本功效。然而，至今還沒(méi)有利用外泌體載藥經(jīng)靜脈注射zhiliaoGBM的報(bào)道，這主要是由于跨越血腦屏障(BBB)仍然是外泌體進(jìn)行腦部中流zhiliao需要解決的難題。盡管如此，Wood等報(bào)道的在進(jìn)行阿茲茨海默病zhiliao時(shí)利用對(duì)腦部神經(jīng)元特異性肽RVG靶向的外泌體穿過(guò)BBB的研究顯示了經(jīng)靶向修飾的外泌體具備穿過(guò)BBB的潛力，因此外泌體載藥zhiliao具有廣闊的前景。成都外泌體label free外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。

作用機(jī)制主要是旁分泌的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）被普遍地用于醫(yī)治各種人類(lèi)疾病。已經(jīng)證明沒(méi)有一個(gè)因素足以調(diào)解MSC的醫(yī)治效果。然而，由許多細(xì)胞（包括MSC）分泌的外泌體膜囊泡是有吸引力的候選物作為其功效的載體。外泌體可以運(yùn)輸和運(yùn)送大量的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，并可以改變細(xì)胞和身體部位的功能。除了作為細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵作用之外，外泌體越來(lái)越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子。此外，它們有潛力被用作臨床應(yīng)用基因和藥物遞送的載體。該文回顧了外泌體的生物發(fā)生、分子組成及其作為細(xì)胞間通訊的信使的作用，著重于其作為干細(xì)胞醫(yī)治的載體的潛力。

膜封閉的囊泡釋放到周?chē)h(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來(lái)越來(lái)越受關(guān)注的問(wèn)題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經(jīng)清楚，不同類(lèi)型的分泌囊泡共存，具有不同的細(xì)胞內(nèi)起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們?cè)谡婧思?xì)胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當(dāng)這些多泡小體與質(zhì)膜融合時(shí)分泌到細(xì)胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細(xì)胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。以前無(wú)法用超速離心法提取的微囊泡，也通過(guò)運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。

卵巢ai患者與良性卵巢疾病患者血清外泌體中的miRNA表達(dá)譜有明顯差異，表明血清外泌體中的miRNA可以作為卵巢ai活檢的替代診斷標(biāo)志物。多項(xiàng)研究表明外泌體中的miR-21在包括大多數(shù)ai癥的多種病理?xiàng)l件下過(guò)度表達(dá)。尿液外泌體來(lái)源于泌尿系統(tǒng)相關(guān)的各種細(xì)胞，包括腎小球足細(xì)胞、腎小管細(xì)胞和膀胱等，因此尿液外泌體數(shù)目、形態(tài)和生化性質(zhì)的改變往往反映泌尿系統(tǒng)疾病。通過(guò)對(duì)前列腺ai癥患者尿液中的外泌體進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，鑒定到兩種已知的前列腺ai癥標(biāo)志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3，前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG，跨膜蛋白酶絲氨酸與ERG的融合基因)，表明尿液外泌體具有診斷和監(jiān)測(cè)ai癥患者狀態(tài)的潛力。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。干細(xì)胞外泌體iTRAQ

外泌體屬于胞外囊泡類(lèi)，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。吉林外泌體tmt

結(jié)果表明，PS親和法可以檢測(cè)到許多目前為止都無(wú)法檢測(cè)的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測(cè)、定量分析外泌體。以前無(wú)法用超速離心法提取的微囊泡，也通過(guò)運(yùn)用PS親和法實(shí)現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書(shū)中對(duì)該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，這項(xiàng)技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評(píng)價(jià)，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即：對(duì)各種外泌體的分類(lèi)。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱(chēng)之為外泌體，給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來(lái)困難。近年，隨著國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)的成立、世界性研究者研討會(huì)的舉辦，提案MISEV指南作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)劃或已經(jīng)開(kāi)始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請(qǐng)務(wù)必閱讀這些方針。吉林外泌體tmt

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