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來源: 發(fā)布時間:2023-07-12

結(jié)果表明,PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強(qiáng)結(jié)合能力,可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明,這項技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價,有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細(xì)胞外囊泡可以稱之為外泌體,給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認(rèn)帶來困難。近年,隨著國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦,提案MISEV指南作為國際標(biāo)準(zhǔn),計劃或已經(jīng)開始進(jìn)行EV研究的科學(xué)家請務(wù)必閱讀這些方針。外泌體發(fā)揮功能:將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標(biāo)志物提供了可能。安徽CD9外泌體慢病毒包裝

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外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體(exosome)是細(xì)胞分泌囊泡(extracellularvesicles)的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞間通信的一種新機(jī)制,允許細(xì)胞交換蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和遺傳物質(zhì)。過去,細(xì)胞分泌的外泌體一度被認(rèn)為只是參與廢物排泄;現(xiàn)在,隨著高通量蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)的發(fā)展,外泌體被寬泛認(rèn)為是生物體內(nèi)細(xì)胞間短距離和長距離交流的高度保守的途徑,這種細(xì)胞間通信對于正常細(xì)胞和瘤細(xì)胞都是非常重要的。成都外泌體NTA有望將外泌體應(yīng)用在各種疾病醫(yī)治上。

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瘤轉(zhuǎn)移是病癥致死的首要原因。長久以來,對瘤轉(zhuǎn)移機(jī)理的研究一直聚焦于瘤與機(jī)體之間的相互作用。然而在近年來,由于外泌體被發(fā)現(xiàn)可以作為包括瘤在內(nèi)細(xì)胞之間信息傳遞的一種新方式,瘤轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域再度變得火熱起來。我所(瘤轉(zhuǎn)移的預(yù)警和預(yù)防研究所)以謝曉東博士為首的外泌體研究小組一直致力于研究瘤轉(zhuǎn)移與外泌體之間的聯(lián)系,已取得一系列成果。外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。

細(xì)胞分泌外泌體的過程一般分為三個階段:(1)質(zhì)膜內(nèi)陷,形成早期內(nèi)吞小泡;(2)內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內(nèi)容物,形成外泌體。外泌體具有獨特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成,另有與細(xì)胞來源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來源外泌體所共有,只有小部分與其來源有關(guān),為其分泌細(xì)胞的特有蛋白,能夠反映分泌細(xì)胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運輸?shù)桨屑?xì)胞,發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。外泌體能向病變細(xì)胞輸送功能性物質(zhì),所以有很大潛力作為基因和藥物遞送的載體。

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Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進(jìn)一步純化胎盤相關(guān)外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證,確定同時表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。羊奶提取試劑盒

臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無細(xì)胞治理劑。安徽CD9外泌體慢病毒包裝

在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案,以達(dá)到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機(jī)制及信號通路等??偠灾?,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施,造福更多的患者。安徽CD9外泌體慢病毒包裝

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