雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢，但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法，但這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力且提取效率較低，難以進(jìn)行臨床推廣和應(yīng)用；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊，往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多，且其售價(jià)較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測靶分子含量時(shí)內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個(gè)流程中成本都很高。外泌體作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。外泌體制備流程

外泌體（Exosome）是一種直徑為30-100nm的納米級脂質(zhì)包裹體結(jié)構(gòu)，內(nèi)部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質(zhì)。外泌體由細(xì)胞分泌釋放出來，在血液等體液內(nèi)傳播，較后又可被其他細(xì)胞吞噬，是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。源自于間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)分泌的外泌體，富含一百多種胞外基質(zhì)蛋白，mRNA信使核糖核酸和多重生長因子。在臨床上，干細(xì)胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍，再生健康皮膚；在護(hù)膚方面，主要是對外傷受損、衰老中毒皮膚進(jìn)行修復(fù)，比較全的調(diào)理皮膚、改善膚質(zhì)，令肌膚恢復(fù)年輕、健康的狀態(tài)。杭州CD81外泌體慢病毒有報(bào)導(dǎo)指出，外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。

研究者利用電穿孔法對外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載，進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。

由于卵巢中流細(xì)胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸（phosphati[1]dylserine，PS）可以外泌體形式分泌入血，惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對照者，因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點(diǎn)也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年，DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團(tuán)隊(duì)合作，通過探究來自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個(gè)人類樣品中細(xì)胞外囊泡和顆粒（extracellularvesicleandparticle，EVP）的蛋白質(zhì)組學(xué)特征，鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白（特異度和靈敏度分別為95%和90%），并可區(qū)分患者的中流類型，使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進(jìn)了一步。外泌體可以直接進(jìn)入受體細(xì)胞影響細(xì)胞功能。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻(xiàn)。杭州CD81外泌體慢病毒

與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目。外泌體制備流程

外泌體有很多潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應(yīng)用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：如何修飾外泌體的靶向性：缺氧瘤細(xì)胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內(nèi)募集；此外，還可通過在外泌體膜表面設(shè)計(jì)與靶細(xì)胞特異性結(jié)合的抗體、配體或受體來實(shí)現(xiàn)。如何提高藥物裝載效率：目前主要有①前裝載方法（首先將藥物加載到母細(xì)胞中，隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細(xì)胞外，常用的方法如轉(zhuǎn)染、共孵育等）；②后裝載方法（直接將藥物加載到外泌體中，例如孵育、電穿孔、超聲、擠出、凍融循環(huán)等）；③其他裝載方法（主要是通過生物工程修飾母細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)）。如何實(shí)現(xiàn)外泌體的大量生產(chǎn)：目前大規(guī)模生產(chǎn)外泌體的方法主要是自發(fā)生產(chǎn)和非自發(fā)生產(chǎn)。外泌體制備流程

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