建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面，隨著EV研究倍受世界矚目，各國啟動(dòng)了大型研究項(xiàng)目。美國啟動(dòng)NIH戰(zhàn)略性大型項(xiàng)目（ExtracellularRNACommunication），國際厲害性學(xué)會(huì)——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會(huì)議小組。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織（IMI）”的支持推進(jìn)的CANCER-ID項(xiàng)目，也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標(biāo)之一，期待會(huì)加速今后的研究發(fā)展。無論如何，今后EV研究的根本就是必須有強(qiáng)有力的研究方法和技術(shù)，而PS親和法有望成為其中之一。外泌體主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。黑龍江CD9外泌體慢病毒

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質(zhì)細(xì)胞來源外泌體與胰腺ai細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)裝載紫杉醇的間充質(zhì)細(xì)胞外泌體具有很強(qiáng)的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細(xì)胞所產(chǎn)生外泌體作為藥物載體。同時(shí)為實(shí)現(xiàn)外泌體運(yùn)輸?shù)陌邢蛐裕辜?xì)胞表達(dá)能夠識(shí)別乳腺ai細(xì)胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關(guān)膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細(xì)胞外泌體中載入阿霉素。結(jié)果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。黑龍江CD9外泌體慢病毒外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導(dǎo)致流體和固體的總含量不同。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進(jìn)病毒感ran等功能。據(jù)估計(jì)，單個(gè)外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細(xì)胞來源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分，也包含與來源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細(xì)胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細(xì)胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識(shí)別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。外泌體作為膜和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細(xì)胞之間傳遞的載體。

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動(dòng)態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測量結(jié)果，因此動(dòng)態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動(dòng)態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測時(shí)，為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準(zhǔn)，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá)，由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。上海CD63外泌體慢病毒包裝

外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標(biāo)記。黑龍江CD9外泌體慢病毒

外泌體可以調(diào)控星狀細(xì)胞（HSC）活化，并參與HSC細(xì)胞遷移的進(jìn)程?；罨腍SC來源的外泌體中，CCN2表達(dá)升高，Twist1和miR-214表達(dá)被抑制，這些外泌體還能誘導(dǎo)靜止的HSC細(xì)胞表達(dá)CCN2。此外，Twist1可以誘導(dǎo)miR-214表達(dá)從而抑制CCN2的表達(dá)。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會(huì)誘導(dǎo)HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點(diǎn)。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號(hào)通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細(xì)胞形態(tài)和TGF-β1誘導(dǎo)的EMT進(jìn)程，減弱肝纖維化。黑龍江CD9外泌體慢病毒