細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式，作為膜和細胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細胞之間傳遞的載體。然而，我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內(nèi)生理相關性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機制。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質(zhì)，總結了其生物學效應，特別是免疫系統(tǒng)，討論了分泌囊泡可能作為細胞間信使的潛在作用。PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。黑龍江CD9外泌體慢病毒包裝

Exosome（外泌體）是由活細胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結構；參與細胞之間的交流，物質(zhì)的運輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤，有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。黑龍江CD9外泌體慢病毒包裝隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn)，近年來，應用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進入受體細胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進病毒感ran等功能。據(jù)估計，單個外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細胞來源的外泌體中既包含與細胞形成、結構和物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關的共有成分，也包含與來源細胞的生物功能相關的特異分子。如B淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞和腸上皮細胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導細胞信號轉(zhuǎn)導、參與生理病理過程中發(fā)揮至關重要的作用。

研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀，極大地降低了外泌體的提取成本，且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子，同時也表達胎盤特異性蛋白分子，證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳，銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見，動態(tài)光散射分析粒徑，結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間，與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后，與細胞共孵育，熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性，進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體，并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定，為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎。外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記。

小鼠骨髓樹突狀細胞產(chǎn)生的外泌體中含有的中流多肽能夠啟動特異性細胞毒性T淋巴細胞，根除或抑制小鼠中流的生長，這一發(fā)現(xiàn)為中流免疫zhiliao提供了新的研究思路。另外，樹突狀細胞來源的外泌體也能夠通過激huo其他免疫細胞誘導抗中流反應，從而抑制中流。B細胞分泌的外泌體包含MHCⅡ-多肽復合物，能夠激huo人和小鼠抗原特異性T細胞，從而實現(xiàn)調(diào)節(jié)免疫響應的功能。細菌或病原體感ran的巨噬細胞外泌體能夠刺激巨噬細胞和中性粒細胞分泌炎性介質(zhì)，在增強機體免疫監(jiān)督方面發(fā)揮重要作用。臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。杭州干細胞外泌體

干細胞外泌體通過改變細胞外基質(zhì)，改變受體細胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組，調(diào)節(jié)細胞凋亡，生長，增殖和分化途徑。黑龍江CD9外泌體慢病毒包裝

外泌體富含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸分子，這些分子具有來源細胞的特異性，所以通過分析中流細胞所釋放的外泌體分子特征就可部分反映其來源細胞表型及其生物學作用。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種中流外泌體來源的蛋白類分子標志物。例如，乳腺ai、結腸ai和胰腺ai中均可檢測到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1（glypican1，GPC1）的表達，且與乳腺ai和結腸ai相比，GPC1對胰腺ai的早期診斷尤具價值。前列腺ai患者血漿外泌體中凋亡抑制蛋白的表達增高則提示與中流進展相關。隨著蛋白組學技術的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)中流患者血液外泌體來源的蛋白標志物其診斷特異性和敏感性分別可達到95％和90％。黑龍江CD9外泌體慢病毒包裝