雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢，但在臨床應用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標準仍然是差速離心法，但這種方法費時費力且提取效率較低，難以進行臨床推廣和應用；而商業(yè)化的試劑盒質量參差不齊，往往導致提取物雜質過多，且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統(tǒng)的內參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標準。外泌體分子標志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。外泌體本身的惰性相當高，但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能。CD81外泌體慢病毒包裝

外泌體（Exosome），是細胞外囊泡（EV）的一種主要類型，是直徑為30至150nm的納米大小的膜結構，大多數(shù)細胞都會分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中，通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂質和代謝物等來發(fā)揮細胞間通訊功能，參與免疫應答、代謝和心血管疾病、神經退行性疾病以及病癥進展等多種生理和病理過程。在內體轉變?yōu)槌墒於嗄遗輧润w（MVE）的過程中，內體膜向腔內出芽形成腔內囊泡（ILV），MVE與細胞膜融合釋放ILV到細胞外，即形成外泌體。牛奶 外泌體外泌體就像是生物界的郵差，可以在細胞間運輸和轉移生物活性分子，是細胞間通訊交流的載體。

外泌體是新型治理劑，瘤轉移是一個包括病細胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復雜過程。外泌體能夠影響這個級聯(lián)反應的每一步，因此可作為瘤治理的靶點。瘤細胞在轉移到其他組織時需要在間質細胞間移動并到達血管中，在這個過程中，瘤細胞外泌體通過纖維連接蛋白促進瘤細胞的運動性，再通過蛋白酶促進細胞外基質的分解、血管生成，進而促進瘤轉移。多數(shù)瘤細胞對轉移的組織具有指向性，而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子，如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性，而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。

由于特殊的結構和循環(huán)方式，外泌體作為藥物運輸?shù)妮d體具有獨特的優(yōu)勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應，從而有選擇性地深入中流組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內容物不受各種生物酶的影響，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中，其體積小，結構、組成與細胞膜類似，導致外泌體可以在避開免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時深入組織內部，有較好的生物相容性;當采用內源外泌體時，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應;除此之外，某些細胞來源或經特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性，可以與特定的qi官或組織結合。細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式。

流式細胞技術針對外泌體的表面抗原標記物進行檢測，能夠實現(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細胞儀進行檢測時往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強反射，操作耗時又費力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細胞儀(HSFCM)，將可檢測的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實現(xiàn)每分鐘10000個外泌體的檢測，并且能夠結合免疫熒光的方法進行外泌體標志蛋白質的定量檢測，目前該儀器已商品化。不同肝臟疾病中，細胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。外泌體提取 方法

外泌體的復雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。CD81外泌體慢病毒包裝

外泌體介導中流耐藥性:中流細胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發(fā)生中起重要作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)lncRNA可以通過競爭性結合miR-34/miR-449，促進晚期腎細胞ai細胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達，引發(fā)舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠將這一lncRNA運輸至舒尼替尼敏感的ai細胞，從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細胞凋亡，并通過結合肌動蛋白絲相關蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1，APAF1)使得卵巢ai細胞產生對紫杉醇的抗藥性。CD81外泌體慢病毒包裝