血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導(dǎo)致的。–80°C保存被公認(rèn)是保存各種生物標(biāo)本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導(dǎo)致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運(yùn)輸過程中有時(shí)很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護(hù)劑,海藻糖可以提供生物保護(hù)作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細(xì)胞外囊泡的損失等。有報(bào)導(dǎo)指出,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。福建外泌體脂質(zhì)組學(xué)
雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢(shì),但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制:外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法,但這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力且提取效率較低,難以進(jìn)行臨床推廣和應(yīng)用;而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊,往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多,且其售價(jià)較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量,蛋白濃度定量,亦或是核酸濃度定量,目前仍存有爭(zhēng)議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體,在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)靶分子含量時(shí)內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級(jí)階段。目前外泌體研究的整個(gè)流程中成本都很高。山東外泌體PKH67隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn),近年來,應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。
干細(xì)胞外泌體可直接促進(jìn)血管生成,改善大腦缺氧后的損傷。因此,干細(xì)胞外泌體可用于中風(fēng)的治理,改善神經(jīng)預(yù)后,增加血管與神經(jīng)生成。干細(xì)胞外泌體對(duì)多種類型的免疫細(xì)胞均具有免疫調(diào)節(jié)作用,包括樹突狀細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。靜脈輸注干細(xì)胞外泌體可抑制CD4+T和CD8+T細(xì)胞的活化和浸潤(rùn),從而延長(zhǎng)GVHD小鼠模型的存活時(shí)間,并減少多個(gè)組織的病理損傷。干細(xì)胞在人類健康領(lǐng)域所發(fā)揮出來的潛能,令人驚嘆。而干細(xì)胞外泌體,作為干細(xì)胞與其它組織細(xì)胞相互交流信息的載體,儼然會(huì)成為生物醫(yī)學(xué)研究的新風(fēng)口之一。
肺病細(xì)胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激種瘤血管的形成來促進(jìn)種瘤的生長(zhǎng)。據(jù)相關(guān)報(bào)道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進(jìn)種瘤血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來促進(jìn)肺病的生血管作用。此外,有研究發(fā)現(xiàn),外泌體中的內(nèi)容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達(dá)增加,促使人正常支氣管上皮細(xì)胞出現(xiàn)EMT,從而使肺支氣管正常上皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖,遷移能力??茖W(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。外泌體能負(fù)載的治理物質(zhì)包括小分子化合物、蛋白質(zhì)、寡核苷酸等,且在體液中寬泛分布且具有定向歸巢能力。
中流細(xì)胞分泌的外泌體可以通過體液進(jìn)入特定qi官,建立有利于ai細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,包括促進(jìn)受體細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、引發(fā)炎癥、促進(jìn)血管生成,為ai細(xì)胞的擴(kuò)散形成有利條件。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)中流細(xì)胞外泌體能夠引導(dǎo)ai癥轉(zhuǎn)移至特定qi官,在膜表面特異性整合素的作用下,中流細(xì)胞外泌體首先在特定的qi官累積,引起受體qi官產(chǎn)生炎癥、生成血管,形成有利于中流轉(zhuǎn)移的微環(huán)境,使得中流細(xì)胞更容易轉(zhuǎn)移至該qi官。Maji等揭示了惡性中流細(xì)胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進(jìn)血管生成,為中流轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。細(xì)胞表面受體表達(dá)不同,外泌體對(duì)受體細(xì)胞的影響可能不同,可能誘導(dǎo)細(xì)胞存活,也可能誘導(dǎo)凋亡或免疫調(diào)節(jié)等。福建外泌體脂質(zhì)組學(xué)
各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。福建外泌體脂質(zhì)組學(xué)
外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù),關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙??贵w親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法,又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。福建外泌體脂質(zhì)組學(xué)