密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應(yīng)用。湖南外泌體Dil

雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢，但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法，但這種方法費時費力且提取效率較低，難以進行臨床推廣和應(yīng)用；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊，往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多，且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。如何直接檢測外泌體外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

當(dāng)外泌體在第1次被發(fā)現(xiàn)的時候，外泌體被認(rèn)為是細胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、瘤侵襲等方方面面。有研究表明瘤來源的外泌體參與到瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進了瘤的生長與侵襲。

外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對如何準(zhǔn)確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認(rèn)為是外泌體分離的“金標(biāo)準(zhǔn)”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結(jié)合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。外泌體能負載的治理物質(zhì)包括小分子化合物、蛋白質(zhì)、寡核苷酸等，且在體液中寬泛分布且具有定向歸巢能力。

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡。如何直接檢測外泌體

實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體。湖南外泌體Dil

科學(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機制功能。例如，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體，高濃度集聚誘導(dǎo)細胞死亡的TNF-α，可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。通過上述介紹可以知道癥狀細胞來源的外泌體含有與癥狀進展相關(guān)的分子，神經(jīng)細胞來源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子，因此，通過壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應(yīng)用，有望將外泌體應(yīng)用在各種疾病醫(yī)治上。甚至可嘗試?yán)猛饷隗w將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕?biāo)細胞中。湖南外泌體Dil