雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：選擇何種細胞作為外泌體的供體：如DCs來源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復合物（MHC）及T細胞共刺激分子，能在體內(nèi)喚醒T淋巴細胞，進而抑制瘤細胞增殖；骨髓來源的間充質(zhì)干細胞（MSCs）來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用；γδT細胞、自然殺傷細胞（NK）、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細胞類型或組織的功能。組織外泌體提取試劑盒成分

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應用不寬泛。組織外泌體提取試劑盒步驟外泌體作為膜和細胞溶質(zhì)蛋白、脂質(zhì)和RNA細胞之間傳遞的載體。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進入受體細胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進病毒感ran等功能。據(jù)估計，單個外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細胞來源的外泌體中既包含與細胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)的共有成分，也包含與來源細胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞和腸上皮細胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導細胞信號轉(zhuǎn)導、參與生理病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

與PC-3細胞相比，PC-3細胞外泌體中含有較高豐度的鞘糖脂、鞘磷脂、膽固醇和磷脂酰絲氨酸。外泌體常見的表面蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白(如CD63、CD9、CD81)、黏附蛋白(如L1CAM、LAMP2)、整合素和糖蛋白(如纖連蛋白)等，而外泌體囊泡內(nèi)蛋白質(zhì)則與來源細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)密切相關(guān)，包含例如熱休克蛋白(HSP70、HSP90)和細胞骨架蛋白(actin、tubulin、cofilin)等。除此之外，外泌體中還攜帶有來源細胞的miRNAs、mRNAs、non-codingRNAs、circularRNAs和DNA等遺傳物質(zhì)。外泌體的完整囊泡結(jié)構(gòu)能夠保護其內(nèi)部生物分子不受體液中各種酶的影響從而保持其完整性和生物活性。細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡。

利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對外泌體標志性蛋白質(zhì)進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì)，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。干細胞外泌體提取試劑盒原理

從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。組織外泌體提取試劑盒成分

妊娠期間胎盤可釋放外泌體到全身循環(huán)系統(tǒng)，參與妊娠期間母胎界面的免疫調(diào)節(jié)、子宮螺旋動脈重塑和胎盤屏障的形成等重要事件調(diào)控，在正常妊娠過程維持中發(fā)揮重要作用。而很多妊娠并發(fā)癥，如子癇前期等胎盤功能紊亂相關(guān)疾病的發(fā)生，很可能與胎盤來源外泌體異常密切相關(guān)。目前外泌體分離方法主要包括：多步差速離心、蔗糖密度梯度離心、試劑盒沉淀、免疫磁珠分選、色譜法、過濾離心等方法。其中，多步差速離心是制備外泌體的經(jīng)典方法，該方法是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù)差速離心將其分離出來，然而妊娠期母血清中除含有胎盤組織釋放的外泌體，還包括許多其他種類細胞釋放的外泌體，如樹突狀細胞、淋巴細胞等，且血清中可能還存在一些大小類似的物質(zhì)混雜其中，這些因素都會影響胎盤來源外泌體的分離純化。組織外泌體提取試劑盒成分