外泌體運(yùn)輸?shù)幕蝾愃幬镆部梢允莔iRNA，miRNA是一類非編碼的內(nèi)源性RNA，主要用于調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)。miRNA主要通過與mRNA的未翻譯的區(qū)域(UTRs)結(jié)合起到抑制基因表達(dá)和降解mRNA的作用。與siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表達(dá)不需要完美的堿基配對(duì)，因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質(zhì)的表達(dá)，而每種siRNA只針對(duì)一種蛋白質(zhì)。miRNA的運(yùn)載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來(lái)越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運(yùn)載miRNA的優(yōu)良載體，并且利用外泌體運(yùn)輸miRNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá)，由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。廣州干細(xì)胞外泌體

尋找肝臟疾病的新型分子標(biāo)志物一直是研究熱點(diǎn)，也是難點(diǎn)。不同肝臟疾病中，細(xì)胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。這些不同生理狀態(tài)下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等，是潛在的分子診斷和預(yù)后標(biāo)志物。肝細(xì)胞患者中，血清外泌體miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明顯上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明顯下降。而HCC患者肝移植復(fù)發(fā)后，血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外，微泡也有可能作為新型標(biāo)志物，研究發(fā)現(xiàn)HCV患病者中CD4+和CD8+T細(xì)胞來(lái)源的微泡含量上升；而肝臟干細(xì)胞分泌的微泡中多種miRNAs上調(diào)。黑龍江外泌體攝取外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。

外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對(duì)稱場(chǎng)流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對(duì)外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長(zhǎng)離心時(shí)間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過大或離心時(shí)間過長(zhǎng)均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率。

在運(yùn)輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細(xì)胞作為母代細(xì)胞，通過化學(xué)轉(zhuǎn)染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結(jié)合，使外泌體對(duì)DOX的運(yùn)輸具有靶向性。將對(duì)iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標(biāo)記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達(dá)中流組織處，說(shuō)明對(duì)iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。外泌體能夠影響級(jí)聯(lián)反應(yīng)的每一步，因此可作為病灶治理的靶點(diǎn)。

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān)，同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞，與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子，構(gòu)建適合病細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外，病細(xì)胞來(lái)源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近，有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞，受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲的活動(dòng)。外泌體主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。外泌體裝載

外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體。廣州干細(xì)胞外泌體

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。廣州干細(xì)胞外泌體