雞血清膽堿酯酶的提取以血清為材料提取農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)酶制劑膽堿酯酶[8-9]。近年來(lái),農(nóng)藥的大量使用和不合理的使用,嚴(yán)重危害了人們的健康,尤其是農(nóng)副產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留成為熱點(diǎn)問(wèn)題,其中以有機(jī)磷農(nóng)藥殘留比較為嚴(yán)重。因此創(chuàng)新農(nóng)藥殘留速檢方案是如今的首要任務(wù),傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)辦法主要是氣相色譜-質(zhì)譜法和高效液相色譜質(zhì)譜法,但因二者檢測(cè)儀器昂貴、操作過(guò)程復(fù)雜費(fèi)時(shí),導(dǎo)致檢測(cè)成本高昂,還不利于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)。而酶抑制法作為新創(chuàng)方法,通過(guò)特定酶對(duì)有機(jī)磷酸和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的敏感程度來(lái)檢驗(yàn)產(chǎn)物中的農(nóng)藥殘留量,具有高效、簡(jiǎn)便、靈敏、成本低等優(yōu)點(diǎn),備受廣大生產(chǎn)基地、市場(chǎng)和基層監(jiān)督部門(mén)的喜愛(ài),因此酶抑制法近期得到了快速發(fā)展。從雞血清中提取膽堿酯酶;需經(jīng)由硫酸銨鹽析沉淀、透析袋透析脫鹽和大孔吸附樹(shù)脂吸附3項(xiàng)處理,再通過(guò)凝膠層析及冷凍干燥等步驟進(jìn)行純化,來(lái)對(duì)膽堿酯酶的粗酶液提取完成預(yù)處理[8]。粗酶液在經(jīng)過(guò)上述處理加工步驟后,再進(jìn)行純化評(píng)價(jià),評(píng)級(jí)合格后全部完成,可得膽堿酯酶的酶粉成品。該試驗(yàn)制得的膽堿酯酶屬于檢測(cè)用酶,在農(nóng)藥檢測(cè)方面起很大作用。我們的胎牛血清具有高效的生產(chǎn)能力和穩(wěn)定的性能,能夠提高客戶(hù)的生產(chǎn)效率和降低成本。臨沂豬血清供應(yīng)商
這幾種不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同。常規(guī)來(lái)說(shuō),年齡越小的牛血清,細(xì)胞培養(yǎng)效果越好。胎牛血清培養(yǎng)效果好于新生牛,且因?yàn)樘ヅN催M(jìn)食過(guò)母乳,所以IgG含量低。故目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。胎牛血清根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求的不同又進(jìn)行了特殊加工工藝加工,那么在這么多種類(lèi)的血清面前,要怎么選擇適合自己細(xì)胞培養(yǎng)的那一款呢?我們需要知道都有哪些種類(lèi)的牛血清和它們的用途:1透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lèi)(lipophilic)物質(zhì),如某些、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等,去除作用對(duì)分子量大小并無(wú)區(qū)分,碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證的作用效果。3去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。煙臺(tái)羊血清生產(chǎn)廠馬血清是一種高質(zhì)量的生物制品,具有極高的純度和生物活性。
牛血清的分類(lèi)及用途簡(jiǎn)介根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采制分離方法分為:胎牛血清:約八月齡胎?;蛉斯ひa(chǎn)胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清:出生14小時(shí)內(nèi)未進(jìn)食的新生牛,通常采用頸動(dòng)脈采集血液分離得到的血清;小牛血清:出生后3天至六月齡小牛動(dòng)脈采集血分離血清;成年牛血清:屠宰時(shí)收集全血后分離得到血清。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中,常用的血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清等。其中,在我國(guó)比較常用的是胎牛血清及新生牛血清,國(guó)際上由于動(dòng)物保護(hù)法的因素,小牛血清、成牛血清多于新生牛血清。
雞血清提取丁酰膽堿酯酶試驗(yàn)以通過(guò)離心提純雞血清得到的膽堿酯酶,繼續(xù)進(jìn)行農(nóng)藥殘留相關(guān)敏感性檢驗(yàn),檢驗(yàn)中同樣采用Ellman法。探究雞血清丁酰膽堿酯酶的酶學(xué)特性及其對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的敏感性[8],為農(nóng)藥殘留的快速檢驗(yàn)提供新的敏感酶源。雖然很多報(bào)道指出,丁酰膽堿酯酶對(duì)農(nóng)藥存在敏感性,但大多數(shù)試驗(yàn)研究對(duì)象都為馬血清提取的丁酰膽堿酯酶,并沒(méi)有用雞血清進(jìn)行比較,而李維[10]在試驗(yàn)前期對(duì)多種動(dòng)物血清內(nèi)丁酰膽堿酯的農(nóng)藥敏感性比較中發(fā)現(xiàn);雞血清內(nèi)丁酰膽堿酯的農(nóng)藥敏感程度優(yōu)于其他試驗(yàn)數(shù)據(jù)的禽畜類(lèi)動(dòng)物血清。并提供了體外丁酰膽堿酯酶對(duì)農(nóng)藥敏感性的基礎(chǔ)研究結(jié)果,雞血清中丁酰膽堿酯酶的比較適反應(yīng)活性為35℃,pH值8.0;對(duì)農(nóng)藥的敏感測(cè)試反應(yīng)中不存在過(guò)量底物的抑制效應(yīng),尤其對(duì)毒扁豆對(duì)堿性表現(xiàn)敏感試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)相比于馬血清的丁酰膽堿酯酶,雞血清的丁酰膽堿酯酶對(duì)鹽酸多奈哌齊較為敏感,在通過(guò)試驗(yàn)中5種農(nóng)藥對(duì)2種酶活性抑制率的比較后發(fā)現(xiàn),除了克百威外,雞血清中的丁酰膽堿酯酶對(duì)其他4種農(nóng)藥的敏感性均高于馬血清中的丁酰膽堿酯酶。因而,雞血清中丁酰膽堿酯酶在含量豐富的同時(shí)對(duì)多種農(nóng)藥的敏感程度還高,必然可以作為檢測(cè)源應(yīng)用于酶抑制法檢驗(yàn)中。胎牛血清是天然的、未經(jīng)處理的,為您的細(xì)胞提供天然的生長(zhǎng)環(huán)境。
一、外觀拿到血清,先接觸的是血清外觀,對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō),外觀的判斷尤為重要。1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采集血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國(guó)產(chǎn)血清的采集血點(diǎn)很分散,大多是由屠戶(hù)采集血后馬上離心收集,所以很少會(huì)有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂。總的來(lái)說(shuō),國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清,質(zhì)量的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色,如Gibco16000,差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然,熱滅活的血清或保存不當(dāng)?shù)难?,由于血紅蛋白的破壞氧化,會(huì)呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。胎新生牛血清具有極好的穩(wěn)定性和保存性,可長(zhǎng)期儲(chǔ)存并保持其生物活性。馬血清哪家好
胎牛血清能夠提供豐富的營(yíng)養(yǎng),促進(jìn)細(xì)胞的快速生長(zhǎng)和分裂。臨沂豬血清供應(yīng)商
雞血清成分的分析將雞血通過(guò)離心技術(shù)分為血漿和血細(xì)胞,得到的血漿再進(jìn)行冷凍處理后,利用快速融解法除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原即是血清。血漿約占血液總量的55%,其中含8%的血漿蛋白,通過(guò)鹽析法可將其分為3類(lèi):白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原,其中纖維蛋白原所占比例比較好小,所以比較好終得到的血清為60%~80%。血清中有90%~91%的水,6.5%~8.5%的蛋白質(zhì),2%左右的低分子量蛋白質(zhì),近年來(lái)對(duì)血清中的低分子量蛋白質(zhì)研究較多,但在利用血清之前需要進(jìn)行過(guò)濾提純,除去血清中的血清蛋白和免疫球蛋白,然后對(duì)提純的低分子量蛋白進(jìn)行試驗(yàn),BjorhallK等人[2]對(duì)目前多種去除血清中大蛋白的方法進(jìn)行了分析研究,發(fā)現(xiàn)除蛋白的試劑盒更適用于試驗(yàn)使用,該試劑盒操作簡(jiǎn)易、方便,因只供一次性使用,所以很大降低了樣品的交叉污染,其中多維親和層析柱還可同時(shí)除去多種大蛋白。因此,血清樣品利用之前要與多種技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行預(yù)處理,之后再進(jìn)行相關(guān)研究。臨沂豬血清供應(yīng)商