雞血清提取丁酰膽堿酯酶試驗(yàn)以通過(guò)離心提純雞血清得到的膽堿酯酶,繼續(xù)進(jìn)行農(nóng)藥殘留相關(guān)敏感性檢驗(yàn),檢驗(yàn)中同樣采用Ellman法。探究雞血清丁酰膽堿酯酶的酶學(xué)特性及其對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的敏感性[8],為農(nóng)藥殘留的快速檢驗(yàn)提供新的敏感酶源。雖然很多報(bào)道指出,丁酰膽堿酯酶對(duì)農(nóng)藥存在敏感性,但大多數(shù)試驗(yàn)研究對(duì)象都為馬血清提取的丁酰膽堿酯酶,并沒(méi)有用雞血清進(jìn)行比較,而在試驗(yàn)前期對(duì)多種動(dòng)物血清內(nèi)丁酰膽堿酯的農(nóng)藥敏感性比較中發(fā)現(xiàn);雞血清內(nèi)丁酰膽堿酯的農(nóng)藥敏感程度優(yōu)于其他試驗(yàn)數(shù)據(jù)的禽畜類(lèi)動(dòng)物血清。并提供了體外丁酰膽堿酯酶對(duì)農(nóng)藥敏感性的基礎(chǔ)研究結(jié)果,雞血清中丁酰膽堿酯酶的比較適反應(yīng)活性為35℃,pH值8.0;對(duì)農(nóng)藥的敏感測(cè)試反應(yīng)中不存在過(guò)量底物的抑制效應(yīng),尤其對(duì)毒扁豆對(duì)堿性表現(xiàn)敏感試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)相比于馬血清的丁酰膽堿酯酶,雞血清的丁酰膽堿酯酶對(duì)鹽酸多奈哌齊較為敏感,在通過(guò)試驗(yàn)中5種農(nóng)藥對(duì)2種酶活性抑制率的比較后發(fā)現(xiàn),除了克百威外,雞血清中的丁酰膽堿酯酶對(duì)其他4種農(nóng)藥的敏感性均高于馬血清中的丁酰膽堿酯酶。因而,雞血清中丁酰膽堿酯酶在含量豐富的同時(shí)對(duì)多種農(nóng)藥的敏感程度還高,必然可以作為檢測(cè)源應(yīng)用于酶抑制法檢驗(yàn)中。云海生物豬血清,純凈度高,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。鄭州羊血清批發(fā)商
血清出現(xiàn)沉淀的問(wèn)題:血清非人工產(chǎn)品,有些東西沉淀出來(lái)系自然現(xiàn)象;纖維蛋白原、鹽析出,如磷酸鈣等;膽固醇和脂肪酸;蛋白析出。沉淀在下列情況下還會(huì)增加:熱滅活、37℃培養(yǎng)(常常由此引發(fā)歧異)、反復(fù)凍融、熔化中沒(méi)有搖勻、gamma照射、長(zhǎng)期存放在2-8°C。另外我們還發(fā)現(xiàn):血清加入到RPMI1640中時(shí),沉淀往往會(huì)發(fā)生或增加:pH升高時(shí),沉淀會(huì)增加;在培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中,因?yàn)榕囵B(yǎng)基的蒸發(fā)也會(huì)導(dǎo)致沉淀的增加。如何避免血清中產(chǎn)生沉淀“”按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì);(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。(6)若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。德州胎牛血清生產(chǎn)商云海生物豬血清,助力您的實(shí)驗(yàn)取得突破性進(jìn)展。
注意事項(xiàng)1.怎樣確定血清使用濃度?這個(gè)只能通過(guò)測(cè)試了。原則上血清添加量不要太多,通常分為5%、10%、20%幾檔。部分細(xì)胞原代提取時(shí)會(huì)使用20%血清,大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時(shí)會(huì)使用5%~10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度,還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖鰷y(cè)試和調(diào)校。2.血清使用前需要離心嗎?其一,因?yàn)檠迦诮夂笥小靶鯛钗铩蔽龀?。如果沒(méi)有出現(xiàn)其他異常情況,或者血清只是用于細(xì)胞培養(yǎng),那么完全沒(méi)有必要離心去除。我們知道血清析出的“絮狀物”主要是血纖蛋白,其在血清中含量很高,而且高度不溶,在血清凍融過(guò)程中極易析出,但它也是完全無(wú)害的,甚至能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。另外,它還增強(qiáng)了血清黏性,為細(xì)胞提供了額外的機(jī)械緩沖。在其析出過(guò)程中,會(huì)粘附培養(yǎng)體系中其他成分,離心去除,反而會(huì)損失營(yíng)養(yǎng)成分。
1牛血清的來(lái)源牛血清來(lái)源于家牛的血液,是凝血或去纖維蛋白的全血離心后的上清成分。牛血清是肉類(lèi)工業(yè)的副產(chǎn)品。在屠宰時(shí),可以從成年牛、小牛、非常年幼的小?;蛟谕涝缀蟀l(fā)現(xiàn)牛懷孕時(shí)從胎牛身上取血,也可以來(lái)自于「供體?!?。通常以取血時(shí)牛的年齡定義牛血清的分類(lèi)。供血牛的年齡會(huì)影響牛血清的特性,例如不同牛齡的牛血清的IgG(免疫球蛋白G,ImmunoglobulinG)含量有較大差異。2牛血清有關(guān)法規(guī)由于牛血清在人用疫苗和獸用疫苗等生物制藥生產(chǎn)中非常重要,很多國(guó)家都將其納入藥典。在我國(guó)的《中華人民共和國(guó)藥典》和《中華人民共和國(guó)獸藥典》中,以及美國(guó)藥典USP、歐洲藥典EP中,都規(guī)定了牛血清的定義和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。胎牛血清是云海生物的明星產(chǎn)品,具有高質(zhì)量和穩(wěn)定性,為您的實(shí)驗(yàn)提供可靠的支持。
牛血清主要成分有以下幾種:1、蛋白質(zhì)包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進(jìn)細(xì)胞附著)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(能結(jié)合鐵離子,減少其毒性和被細(xì)胞利用)、纖維粘連素(促進(jìn)細(xì)胞附著生長(zhǎng))等;2、多肽血小板生長(zhǎng)因子,還有成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。3、含有胰島素、生長(zhǎng)因子、促生長(zhǎng)素、氫化可的松等。4、脂類(lèi)血清中含少量脂肪酸、亞油酸、油酸、乙醇胺和磷酸-乙醇胺等。5、其他成分含有氨基酸、葡萄糖、微量元素等,微量元素及鐵、銅、鋅,以及一些天然制品中的未知成分。云海生物致力于提供高質(zhì)量的胎牛血清,我們的產(chǎn)品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,確保每一批次的穩(wěn)定性和一致性。河北雞血清培養(yǎng)基
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在細(xì)胞體外培養(yǎng)的早期,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)采用的大多是天然培養(yǎng)基,即直接取自于動(dòng)物組織提取液或體液,如血漿、血清、胚胎浸出液等。目前尚在使用的天然培養(yǎng)基主要有牛血清(BovineSerum)以及其它動(dòng)物血清等。細(xì)胞培養(yǎng)中常用的牛血清是一種組分復(fù)雜且尚不完全明確的混合物,含有上千種蛋白質(zhì),提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需要一些生長(zhǎng)因子、貼附因子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。通常在基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基中添加5%~10%的牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)。除了促細(xì)胞貼壁和細(xì)胞生長(zhǎng)之外,牛血清在一些病毒培養(yǎng)生產(chǎn)過(guò)程中被用作保護(hù)劑,在體外診斷試劑生產(chǎn)中也有較多應(yīng)用,如封閉液、稀釋液等,其作用與牛血清白蛋白(BSA)類(lèi)似,起保護(hù)作用。鄭州羊血清批發(fā)商