酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測(cè)器??珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類,但其工作原理基本上都是一致的,其原理都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。 測(cè)定一般要求測(cè)試液的總體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。 用途 可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè),酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISAs),細(xì)胞增殖與毒性分析,細(xì)胞凋亡檢測(cè)(MTT),報(bào)告基因檢測(cè)及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等酶標(biāo)儀一定要放在一個(gè)干凈、平整的工作臺(tái)上,要注意防塵、防潮、防曬、防震、防撞。上海如何選酶標(biāo)儀操作
酶標(biāo)儀的前世今生 酶標(biāo)儀問(wèn)世之初,是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA的常規(guī)檢測(cè)儀器。發(fā)展到如今,凡是與光信號(hào)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、需要高通量、需要節(jié)省試劑的實(shí)驗(yàn),且可以轉(zhuǎn)移到微孔板中的液體物質(zhì),都可以考慮使用微孔板檢測(cè)儀(酶標(biāo)儀)進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。因此,人們沿用早期“ELISA Plate Reader”的酶標(biāo)儀俗稱,其實(shí)現(xiàn)在已經(jīng)突破了ELISA的范疇,更常用的英文名稱是“Microplate Reader”,譯為“微孔板讀板機(jī)(儀)”。 早期的酶標(biāo)儀本質(zhì)是一臺(tái)分光光度計(jì),用比色法對(duì)96孔微孔板中微量體積液體的吸光值(Absorbances,Abs)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí),光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔板中的待測(cè)樣本,一部分光被樣本吸收,另一部分則透過(guò)樣本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將不同待測(cè)樣本的強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)電信號(hào),再經(jīng)前置放大、對(duì)數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)結(jié)構(gòu)x和y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程。其中,光吸收檢測(cè)技術(shù)原理符合朗伯比爾定律。廣東設(shè)備酶標(biāo)儀怎么用上海穩(wěn)贏機(jī)電設(shè)備的全自動(dòng)酶標(biāo)儀具有先進(jìn)的數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)。
全自動(dòng)酶標(biāo)儀 基于微孔板的測(cè)量檢測(cè)由樣品產(chǎn)生、由樣品轉(zhuǎn)換或通過(guò)樣品傳輸?shù)墓庑盘?hào)。信號(hào)由檢測(cè)器測(cè)量,通常是光電倍增管 (PMT)。 PMT 將光子轉(zhuǎn)化為電能,然后通過(guò)酶標(biāo)儀進(jìn)行量化。此過(guò)程的輸出是量化樣本的數(shù)字。 根據(jù)反應(yīng)過(guò)程中光信號(hào)變化的性質(zhì)以及檢測(cè)模式,樣品可能需要被特定波長(zhǎng)的光激發(fā)。這種光通常由寬帶氙氣閃光燈提供。為了通過(guò)特定波長(zhǎng)激發(fā)樣品,燈產(chǎn)生的光由特定的激發(fā)濾光片或單色器選擇。為了提高靈敏度和特異性,在發(fā)射/檢測(cè)端同樣采用過(guò)濾器或單色器。它們通常放置在樣品和檢測(cè)器之間。
選購(gòu)指南 酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。 國(guó)內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開(kāi)展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目,如:乙肝五項(xiàng)、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法,報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如:某弓形蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對(duì)照品的OD值×2.5,通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過(guò)臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過(guò)另一孔顏色的2.5倍就不可能。酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。
七、雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià) 方法:在運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品時(shí),由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等,這些都是儀器測(cè)定過(guò)程中常見(jiàn)的干擾因素,而標(biāo)本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對(duì)測(cè)定結(jié)果影響則較小,因此我們將文獻(xiàn)中的雙被長(zhǎng)評(píng)價(jià)方法改為:取同一廠、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065~0.070A)先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)(490nm)和雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630/650nm)進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)消除干擾因素的效果。酶標(biāo)儀的中心是一個(gè)光度計(jì),可以測(cè)量透射光和發(fā)射光的強(qiáng)度。上海新型酶標(biāo)儀大全
在清洗酶標(biāo)板時(shí),要輕輕擦拭每個(gè)孔位,避免用力過(guò)猛導(dǎo)致孔口變形或損壞。上海如何選酶標(biāo)儀操作
4.吸光度測(cè)定的重復(fù)性 波長(zhǎng)選擇同(3),在酶標(biāo)板的一排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測(cè)定5次。記錄每次測(cè)定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對(duì)應(yīng)孔吸光度值。按下式計(jì)算重復(fù)性: 5.酶標(biāo)儀的線性 選用540nm波長(zhǎng),將標(biāo)稱值0.5,1.0A中性濾光片分別放入專業(yè)測(cè)試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復(fù)測(cè)定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專業(yè)測(cè)試板的同一孔位中,重復(fù)測(cè)定3次。 6.測(cè)定速度的檢定 選用492nm波長(zhǎng),放入96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測(cè)定,用秒表計(jì)測(cè)儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時(shí)間。 酶標(biāo)儀除了在選購(gòu)時(shí),應(yīng)盡可能自檢外,在使用中也應(yīng)定期檢定,以保證酶標(biāo)儀測(cè)定的有效性上海如何選酶標(biāo)儀操作