紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應(yīng)用

我們知道，成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子，隨著時間的推移，卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極，進(jìn)而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時，雌雄原核會出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對于那些沒有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時間窗，發(fā)現(xiàn)沒有受精時再去補救ICSI，往往錯過了卵子的比較好受精時間，因為沒有受精的卵子會在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們在加精后的4-6小時，通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。

當(dāng)然，偶爾也會出現(xiàn)錯誤補救。文獻(xiàn)報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補救，實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個紡錘體，17.3%含有兩個紡錘體，并對含有一個紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補救ICSI；而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體，只對未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 紡錘體微管的動態(tài)變化受到細(xì)胞周期蛋白的調(diào)控。上海輔助生殖紡錘體卵冷凍研究

隨著科技的進(jìn)步，冷凍與解凍技術(shù)也在不斷創(chuàng)新。例如，玻璃化冷凍技術(shù)因其快速冷凍和解凍的特點，能夠有效減少冷凍過程中的冰晶形成和滲透壓變化對紡錘體的損傷。此外，一些研究者還嘗試將微流控技術(shù)應(yīng)用于卵母細(xì)胞的冷凍保存中，以實現(xiàn)更精確的溫度控制和更均勻的冷凍保護(hù)劑分布。無損觀察技術(shù)如偏光顯微鏡（Polscope）和冷凍電鏡（Cryo-EM）等的應(yīng)用為MI期紡錘體卵冷凍研究提供了新的視角。這些技術(shù)能夠在不破壞卵母細(xì)胞活性的情況下實時觀察紡錘體的形態(tài)和變化，從而更準(zhǔn)確地評估冷凍保存的效果。上海輔助生殖紡錘體卵冷凍研究紡錘體在細(xì)胞分裂過程中經(jīng)歷明顯的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。

選擇合適的冷凍保護(hù)劑是減少冷凍損傷的關(guān)鍵。然而，不同濃度的冷凍保護(hù)劑對MI期卵母細(xì)胞紡錘體的影響各異，需要通過大量實驗進(jìn)行優(yōu)化。此外，冷凍保護(hù)劑的滲透性和毒性也是需要考慮的因素。冷凍和解凍過程中的溫度控制、時間控制以及操作手法等都會對MI期卵母細(xì)胞的紡錘體造成影響。因此，需要不斷優(yōu)化冷凍和解凍程序，以減少對紡錘體的損傷。近年來，研究者們通過不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方，取得了進(jìn)展。例如，一些研究表明，使用高濃度的蔗糖作為冷凍保護(hù)劑可以提高M(jìn)I期卵母細(xì)胞的存活率和紡錘體穩(wěn)定性。此外，還有一些新型冷凍保護(hù)劑如乙二醇、丙二醇等也被應(yīng)用于MI期卵母細(xì)胞的冷凍保存中。

紡錘體卵冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點。紡錘體作為卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的主要結(jié)構(gòu)，其穩(wěn)定性和形態(tài)直接關(guān)系到卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力和受精后的胚胎質(zhì)量。然而，傳統(tǒng)的紡錘體觀測方法往往需要對卵母細(xì)胞進(jìn)行固定和染色，這不僅破壞了細(xì)胞的活性，還可能引入額外的損傷。因此，非侵入式成像技術(shù)作為一種新興的研究手段，在紡錘體卵冷凍研究中展現(xiàn)出了巨大的潛力和優(yōu)勢。非侵入式成像技術(shù)是指在不破壞細(xì)胞完整性和活性的前提下，通過光學(xué)、聲學(xué)、電磁等物理手段對細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像的方法。這類技術(shù)避免了傳統(tǒng)方法中細(xì)胞固定和染色帶來的損傷，能夠?qū)崟r、動態(tài)地觀察細(xì)胞內(nèi)部的變化，為研究者提供了更加真實、準(zhǔn)確的細(xì)胞信息。在紡錘體卵冷凍研究中，非侵入式成像技術(shù)能夠直接觀測到冷凍和解凍過程中紡錘體的形態(tài)和動態(tài)變化，為評估冷凍效果和優(yōu)化冷凍方案提供了有力支持。紡錘體的形成與消失是細(xì)胞周期中高度動態(tài)的過程。

紡錘體是如何形成的(1)

紡錘體是動植物細(xì)胞分裂期形成的與染色體正常分離直接相關(guān)的分裂器，紡錘體的裝配在有絲分裂的前期完成。動物細(xì)胞紡錘體由星體微管、極間微管、動粒微管及其結(jié)合蛋白構(gòu)成，因含有星體微管故稱有星紡錘體。無中心體的動物細(xì)胞和植物細(xì)胞也能形成紡錘體，因不含有星體微管而稱之為無星紡錘體。微管是由α、β微管蛋白異源二聚體及少量微管結(jié)合蛋白聚合而成的亞穩(wěn)定動態(tài)結(jié)構(gòu)。動物細(xì)胞的中心體由一對相互垂直的圓筒狀中心粒及中心體基質(zhì)構(gòu)成。它是紡錘體微管向外生長的**，又稱微管組織中心。在有絲分裂前間期的S期初期，中心體開始復(fù)制倍增，在G2期結(jié)束時完成。在細(xì)胞分裂期前期，間期復(fù)制倍增的兩個中心體分離，每一個中心體形成放射狀排列的微管，稱為星體，每個中心體是它自身星體的**。在有絲分裂細(xì)胞周期的分裂期，微管通過持續(xù)增加和丟失組成微管的微管蛋白亞基來實現(xiàn)微管的聚合和解聚，微管始終處于生長和縮短的更替中。在分裂前期，紡錘體微管由游離的微管蛋白組裝而成，介導(dǎo)染色體的運動；分裂末期，紡錘體微管解聚，又組裝形成細(xì)胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)。紡錘體微管包括動粒微管、極間微管和星體微管. 紡錘體在減數(shù)分裂中也發(fā)揮重要作用，確保生殖細(xì)胞染色體正確分離。上海核移植紡錘體胚胎發(fā)育

紡錘體在細(xì)胞分裂過程中展現(xiàn)出驚人的自我組裝能力。上海輔助生殖紡錘體卵冷凍研究

卵母細(xì)胞冷凍保存主要采用兩種方法：慢速冷凍法和玻璃化冷凍法。相較于傳統(tǒng)的慢速冷凍法，玻璃化冷凍法因其更高的解凍存活率和妊娠成功率而逐漸成為主流技術(shù)。玻璃化冷凍法的基本原理是將含有生物樣本的溶液在極短的時間內(nèi)（如幾分鐘內(nèi)）冷卻至液氮溫度，使溶液在凝固點以下形成無冰晶的半固體或固體狀態(tài)。這種方法避免了冰晶形成對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞，從而減少了冷凍損傷。在卵母細(xì)胞冷凍保存中，玻璃化冷凍法通過優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的濃度和冷凍速率，使卵母細(xì)胞在冷凍過程中保持其結(jié)構(gòu)的完整性。上海輔助生殖紡錘體卵冷凍研究