數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。
數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標(biāo)分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。
MicroDrop?數(shù)字PCR可廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)療、出入境檢驗檢疫等領(lǐng)域。無錫廣州永諾數(shù)字PCR品牌
MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR 應(yīng)用范圍如下:
a. 動植物檢驗檢疫,動物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測;
b. 降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風(fēng)險評估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監(jiān)測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導(dǎo);
c. 可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。
d.基因表達(dá)差異監(jiān)測單細(xì)胞研究:測序、PCR
e.無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速、傳染性疾病:HBV、HIV、COVID-19 定量
南京國產(chǎn)數(shù)字PCR原理線性范圍達(dá)到6個數(shù)量級,靈敏度高達(dá)萬分之一。
數(shù)字PCR(Digtal PCR)是一種核酸定量精密檢測的新興技術(shù)手段,于20世紀(jì)由Vogelstein等提出。它是將稀釋后的核酸模板分配到大量不同的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中有一個或沒有核酸。利用PCR擴增的同時,加入可檢測熒光。待擴增結(jié)束時,使用統(tǒng)計學(xué)方法采集每個反應(yīng)單元出現(xiàn)的熒光次數(shù),從而定量檢測樣本中的核酸濃度。
基于分液方式的不同,數(shù)字PCR主要分為3種:微流體數(shù)字PCR(Microfluidic digital PCR,mdPCR)、微滴數(shù)字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)和芯片數(shù)字PCR(Chip digital PCR,cdPCR)。
與常規(guī)PCR方法相比,數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢:
1、能夠完全定量:常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線,但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響,可進行完全定量。
2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本
3、靈敏度高:數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個**PCR反應(yīng),這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。
4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個**反應(yīng)體系中,明顯降低了背景信號和yì zhì物對反應(yīng)的干擾,擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。
準(zhǔn)確的定量結(jié)果和優(yōu)異的重復(fù)性。
數(shù)字PCR可以直接計算目標(biāo)序列的拷貝數(shù),因此無需依賴于對照樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以進行精確的***定量檢測;此外,由于數(shù)字PCR在進行結(jié)果判讀時*判斷有/無兩種擴增狀態(tài),因此也不需要檢測熒光信號與設(shè)定閾值線的交點,完全不依賴于Ct值的鑒定,因此數(shù)字PCR的反應(yīng)受擴增效率的影響**降低,對PCR反應(yīng)***物的耐受能力**提高;數(shù)字PCR實驗中標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分配的過程可以極大程度上降低與目標(biāo)序列有競爭性作用的背景序列濃度,因此數(shù)字PCR技術(shù)也特別適合在復(fù)雜背景中檢測稀有突變。無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速。深圳微流控芯片數(shù)字PCR現(xiàn)貨
能檢測低至0.01%的突變基因。無錫廣州永諾數(shù)字PCR品牌
MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點:
一、適應(yīng)性廣,靈活性高
1、理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應(yīng)用
2、樣本多樣性,樣本通量可達(dá)96個樣本,支持靈活設(shè)定
3、開放式平臺,支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。
二、靈敏度高,準(zhǔn)確性高
1、***定量——無需依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線
2、采用微滴式技術(shù)高達(dá)100,000個的微滴
3、線性范圍達(dá)到6個數(shù)量級,靈敏度高達(dá)萬分之一
三、可分析復(fù)雜混合物
1、準(zhǔn)確度不完全依賴于擴增效率
2、雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法
3、支持多重數(shù)字PCR
四、操作簡單,使用方便
1、全封閉防污染設(shè)計,一鍵式自動化操作。
2、可選全中文分析軟件 無錫廣州永諾數(shù)字PCR品牌
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應(yīng)國內(nèi)外先進儀器和設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產(chǎn)品和專業(yè)的服務(wù)。
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