微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對(duì)樣品進(jìn)行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬(wàn)個(gè)納升級(jí)的微滴,其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后,逐個(gè)對(duì)每個(gè)微滴進(jìn)行檢測(cè),有熒光信號(hào)的微滴判讀為1,沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢(shì)不依賴Ct值或內(nèi)參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本,且更實(shí)用。率先行業(yè)的10萬(wàn)個(gè)微滴數(shù),保證泊松分布所需要的充分的樣本量。南通數(shù)字PCR報(bào)價(jià)
相對(duì)于二代測(cè)序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢(shì):●靈敏度可達(dá)到單個(gè)核酸分子:檢測(cè)限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;●無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對(duì)比來(lái)測(cè)定核算量,可對(duì)靶分子起始量進(jìn)行***定量,直接獨(dú)處DNA分子 的個(gè)數(shù);●適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測(cè):終點(diǎn)PCR檢測(cè),不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR 劑的影響,避免樣品間的交叉 問(wèn)題,適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行 定量,如動(dòng)血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;上海微流控芯片數(shù)字PCR簡(jiǎn)介不依賴Ct值,無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線。
無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細(xì)有效的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測(cè)孕婦胎兒 游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時(shí),可以**的檢測(cè)出HBB基因突變[3],可以說(shuō)是相當(dāng)厲害了。
基因檢測(cè)**前沿的兩種方法是:高通量測(cè)序(NGS)和數(shù)字PCR(dPCR)。高通量測(cè)序技術(shù)又稱“下一代”測(cè)序技術(shù),可以一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定,功能強(qiáng)大,但是實(shí)驗(yàn)操作較復(fù)雜,數(shù)據(jù)分析難度較大,檢測(cè)周期長(zhǎng),成本較高。數(shù)字PCR技術(shù)是目前**精細(xì)**靈敏的基因檢測(cè)技術(shù),借助微液滴或微腔室,通過(guò)單個(gè)模板分子的PCR擴(kuò)增,可實(shí)現(xiàn)不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本的***定量。與NGS相比,數(shù)字PCR靈敏度高、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易讀、成本低廉等優(yōu)勢(shì)使其更適合臨床檢測(cè),成為精細(xì)醫(yī)療實(shí)現(xiàn)平民化、大眾化的比較好選擇。此外,數(shù)字PCR還在基因表達(dá)差異研究、拷貝數(shù)變異(CNV)研究、低豐度DNA模板分子的精確定量、甲基化含量鑒定、二代測(cè)序輔助建庫(kù)、CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證、轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)、移植排異監(jiān)控、腸道菌群分析以及***基因組檢測(cè)等眾多領(lǐng)域中有著優(yōu)異的應(yīng)用。單張芯片一次可處理8個(gè)樣本。
定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):1.在20多年的使用和發(fā)展中,定量PCR作為一種技術(shù)平臺(tái),已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù),在工業(yè)界和分子檢測(cè)的某些應(yīng)用上,定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?;A(chǔ)研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)指南”。2.在定量PCR的各種應(yīng)用中,基因表達(dá)分析(geneexpressionanalysis)的應(yīng)用比重約占七成,綜合各種因素來(lái)看,眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。3.上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動(dòng)化程度、各種檢測(cè)探針與染料、檢測(cè)通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。4.就目前市場(chǎng)上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來(lái)看,定量PCR在檢測(cè)的線性范圍上具有優(yōu)勢(shì),意味著同一個(gè)run內(nèi)可對(duì)各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析。數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測(cè)序技術(shù),共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器。常州MicroDrop-100數(shù)字PCR如何選型
雙通道熒光檢測(cè),支持EvaGreen染料及探針?lè)?。南通?shù)字PCR報(bào)價(jià)
二代測(cè)序輔助建庫(kù)目前靶向測(cè)序建庫(kù)方法包括擴(kuò)增子方法,在均相溶液中,當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí),由于擴(kuò)增引物之間的相互作用,從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增,將可降低引物間相互作用,提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于少量模板的有效擴(kuò)增,得到更多的有效測(cè)序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功,仍需要高靈敏度的檢測(cè)方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對(duì)核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測(cè),但精確定量評(píng)估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。南通數(shù)字PCR報(bào)價(jià)
浚和(上海)儀器科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大。一批專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),是實(shí)現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:真空泵,噴霧干燥機(jī),高溫?zé)o氧烘箱,滅菌器等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營(yíng)宗旨,深受客戶好評(píng)。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的真空泵,噴霧干燥機(jī),高溫?zé)o氧烘箱,滅菌器形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。