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南京國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-14

研究方向無創(chuàng)產(chǎn)前篩查無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷,如21號(hào)染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨(dú)特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補(bǔ)充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷,從而提高工作效率及節(jié)約成本。轉(zhuǎn)基 因食品或成分的檢測目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時(shí)采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(CertifiedReferenceMaterialsCalibrants,CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。油包水乳化微滴技術(shù),在微管道中利用氣壓驅(qū)動(dòng)生成十萬個(gè)微滴,單個(gè)微滴體積體積低至皮升級(jí)。南京國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

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數(shù)字PCR是一種核酸分子 定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;,Ct值就是指可以檢測到熒光值對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù);數(shù)字PCR是***的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量,是一種 定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào),沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。常州JUE對(duì)定量數(shù)字PCR現(xiàn)貨MicroDrop?數(shù)字PCR平臺(tái)是由永諾生物自主研發(fā)并已投入生產(chǎn)的微滴式數(shù)字PCR檢測系統(tǒng)。

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研究方向甲基化含量鑒定作為表觀遺傳學(xué)研究中重要的一個(gè)研究方向——甲基化程度分析,現(xiàn)階段有不同的方法或技術(shù)來進(jìn)行研究:如傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽處理后的克隆測序統(tǒng)計(jì)法、抗體檢測法、定量PCR檢測法等。這些方法皆因方法學(xué)的問題而不能獲得精確的定量,而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過對(duì)樣品的微滴化處理及目標(biāo)因子的***拷貝數(shù)定量,為甲基化程度的精確定量檢測提供了一種全新 的技術(shù)。*****的伴隨診斷常用體液來源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等)的待檢標(biāo)本中的DNA,有正常脫落體細(xì)胞和病變脫落細(xì)胞兩種來源,前者的量遠(yuǎn)大于后者。通過微液滴處理能在每個(gè)微液滴中有效減少正常體細(xì)胞DNA的干擾,實(shí)現(xiàn)**標(biāo)記物的有效檢測,如EGFR,ALK,ROS1,KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴(kuò)增檢測等,應(yīng)用于**精細(xì)醫(yī)學(xué)的伴隨診斷。

研究方向*****的實(shí)時(shí)監(jiān)控已有數(shù)篇文章報(bào)道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)患者***過程中的循環(huán)**DNA(ctDNA)進(jìn)行檢測,實(shí)時(shí)監(jiān)控疾病進(jìn)展。在非小細(xì)胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標(biāo)相比,ctDNA突變及豐度改變通常會(huì)提前數(shù)月出現(xiàn),這樣就可以提醒醫(yī)生及時(shí)調(diào)整***方案,使患者得到更有效的***。隨著數(shù)字PCR熒光通道的增加和多指標(biāo)檢測的成熟,數(shù)字PCR將會(huì)進(jìn)入更多應(yīng)用領(lǐng)域,有力推動(dòng)生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、檢驗(yàn)檢疫、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的快速發(fā)展。超高靈敏度,適用于稀有序列及稀有突變的檢測。

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數(shù)字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進(jìn)行稀釋,分配到大量 的反應(yīng)單元中,使每個(gè)反應(yīng)單元中只有單個(gè)模板分子,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)每個(gè)反應(yīng)室的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴(kuò)增后定量,因此不依賴擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可以實(shí)現(xiàn)***定量分析。由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí),靈敏度高達(dá)萬分之一。深圳微流控芯片數(shù)字PCR哪家好

單細(xì)胞研究:測序、PCR。南京國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率 。而精細(xì)有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時(shí),可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。南京國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

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