羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化,量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點:--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針,必須對其進行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團的修飾來實現(xiàn)。與TRITC一樣,羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm(比較大吸收波長)和576nm(比較大發(fā)射)。D-熒光素鉀鹽小動物成像。吉林成都熒光染料
異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機熒光染料,目前,這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術(shù)中。在495/517nm處,該染料會產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值,并可借助異硫氰酸鹽反應基團與不同抗體結(jié)合,該基團可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團相結(jié)合。而它的基本成分——熒光素,其摩爾質(zhì)量為332g/mol,常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料,且其被當成AlexaFluor®488等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng),而該系統(tǒng)受藍色光譜中的光所激發(fā)。經(jīng)常與FITC同時使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反,TRITC并非熒光素,而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個大的共軛芳香電子系統(tǒng),正是該系統(tǒng)引發(fā)了它們的熒光行為。還有一點與FITC相反,TRITC(479g/mol)由比較**長為550nm的綠色光譜中的光所激發(fā),它的比較大發(fā)射波長為573nm。與蛋白質(zhì)(例如,抗體)結(jié)合也基于異硫氰酸鹽反應基團。吉林成都熒光染料Super Fluor 680(效果同Alexa Fluor 680)琥珀酰亞胺酯熒光染料。
選擇熒光染料時要考慮那些因素:激發(fā)波長處的消光系數(shù)應盡可能高:消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應該盡可能高:這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應該是光穩(wěn)定的:遺憾的是,比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為:對于STORM實驗,您需要一個閃爍的熒光團。但是,對于分子跟蹤實驗,您***不想要閃爍的熒光團?;?死細胞滲透性。您想要的反應側(cè)基(例如HaloTag、抗體等)。當您使用多個熒光探針時,尤其是當您量化共定位時,請謹慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨測試所有熒光探針以評估滲透。
納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸,納米粒子通常用于不同類型的細胞和組織的熒光成像。當今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點、貴金屬納米顆粒、聚合物點、量子點和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中,與其他分子熒光團和探針相比,納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢,使其成為理想的選擇。除了提高亮度外,納米粒子是惰性的并且往往分布均勻,這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外,與各種分子熒光團相比,納米顆粒和納米材料沒有細胞毒性,并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性,大多數(shù)熒光納米顆粒(染色納米顆粒)可以內(nèi)化到細胞/組織中,并容易靶向給定部位。DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料,它們是一族親脂性的熒光染料,用于細胞的形態(tài)學和結(jié)構(gòu)研究。
琥珀酰亞胺酯(Succinimidylesters)/NHS酯活性熒光染料用于標記抗體,蛋白質(zhì),肽,胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基(-NH2)2、馬來酰亞胺(Maleimides)活性熒光染料用于標記抗體,蛋白質(zhì)和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過點擊化學法(Click)標記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過點擊化學方法標記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經(jīng)碳二亞胺預活化后用于標記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料,用于與各種親電子化合物(如活化的酯和環(huán)氧化物)偶聯(lián)。DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。寧夏熒光染料納米
吲哚菁綠(Indocyanine Green,簡稱ICG)是一種廣泛應用于醫(yī)學和生物領(lǐng)域的熒光染料。吉林成都熒光染料
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族,用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料,當它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì),雖然在水中其熒光強度很弱)結(jié)合時,其熒光強度***增強。它們具有很高的淬滅系數(shù),偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應用于細胞中,這種染料會在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散,導致在其比較好濃度條件下,將整個細胞染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā),并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長,為標記細胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用,因為它們所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織,并且在紅外光范圍內(nèi),其本底熒光水平很低。吉林成都熒光染料
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