熒光染料在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用1、細(xì)胞膜標(biāo)記:可以使用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞膜,以觀察和研究細(xì)胞膜的動(dòng)態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標(biāo)記:用熒光染料標(biāo)記染色體或DNA,可以觀察和分析DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等過(guò)程3、蛋白質(zhì)標(biāo)記:通過(guò)熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì),可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運(yùn)動(dòng)等特性。4、細(xì)胞器標(biāo)記:使用特定波長(zhǎng)的熒光染料可以標(biāo)記和可視化細(xì)胞中的線粒體、溶酶體等細(xì)胞器。5、神經(jīng)科學(xué)應(yīng)用:熒光染料在神經(jīng)科學(xué)中也有廣泛應(yīng)用,如標(biāo)記神經(jīng)元和突觸,觀察神經(jīng)信號(hào)的傳遞等。6、基因表達(dá)分析:通過(guò)熒光染料標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物,可以定量分析基因的表達(dá)水平和細(xì)胞中的分布情況。Super Flour 系列熒光探針,具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH 4~10), 更好的抗淬滅性。廣西熒光染料合成
D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應(yīng)的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值,當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^(guò)量時(shí),光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報(bào)告基因?;瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)幾乎沒(méi)有背景,使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器可以可靠地測(cè)量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達(dá)報(bào)告者的作用外,熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測(cè)中[1]。我們提供螢火蟲(chóng)熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。熒光染料Fluor 488花青類(lèi)熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個(gè)氮原子)之間的聚甲炔染料。
Cy5:激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè);3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù),熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多,易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
5、PE:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè);3)其熒光泯滅性強(qiáng),不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù),但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。
6、PE-TR:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀,也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。
7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀,也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應(yīng)用,作為抗體和其他探針標(biāo)記,用熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性,是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測(cè)**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物,以及一系列具有針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。
如何選擇的染料?
考慮到熒光染料種類(lèi)繁多,您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料?以下是您需要考慮的一些因素?!c實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的兼容性:雖然它們可能與其他熒光團(tuán)共享一些光譜相似性,但每種染料都是***的,并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功,請(qǐng)選擇與您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相輔相成的一種。與設(shè)備的兼容性:選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時(shí),請(qǐng)考慮儀器的靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果,請(qǐng)確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測(cè)方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性:在雙重或三重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團(tuán)重疊。由于許多天然存在的細(xì)胞成分會(huì)以與您選擇的染料或探針相同的波長(zhǎng)發(fā)出熒光,因此您還需要確??梢詮谋尘白园l(fā)熒光中清楚地識(shí)別所選染料產(chǎn)生的信號(hào)。 DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料,它們是一族親脂性的熒光染料,用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。熒光染料Fluor 488
熒光染料可以單獨(dú)使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。廣西熒光染料合成
Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀y3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右,它的熒光肉眼觀察很明亮,并且對(duì)pH不敏感,在共聚焦顯微鏡中可以用532nm(肩峰)或者556nm(頂峰)的激光束激發(fā),在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察,所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy3也是Dil等細(xì)胞電位追蹤劑的母核,所以它是在生物技術(shù)中非常有用的熒光染料。在熒光成像時(shí),Cy3的背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來(lái)標(biāo)記蛋白,抗體,多肽等,它常見(jiàn)的使用是標(biāo)記核酸分子(DNA和RNA)。基于熒光圖譜的相似性,Cy3可以被TAMRA,TRITC, BODIPY TMR等染料替代,在需要更明亮,更穩(wěn)定的替代物時(shí),可以考慮使用AF547或者AF555等。廣西熒光染料合成
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