基因***是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。通過攜帶質(zhì)粒DNA、mRNA和siRNA,陽離子聚合物實現(xiàn)了與***相關(guān)的功能,如基因增強、基因抑制和基因組編輯?;?****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質(zhì)編碼基因。在當(dāng)前**背景下,mRNA疫苗的大規(guī)模使用點燃了人們對核酸藥物的濃厚興趣。理論上,mRNA能夠表達任何一種蛋白質(zhì);因此,除了作為疫苗預(yù)防傳染病外,它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術(shù)是基于脂質(zhì)納米顆粒平臺,該技術(shù)的**掌握在少數(shù)幾家公司手中。此外,由脂質(zhì)納米顆粒組成的mRNA疫苗應(yīng)在**溫下儲存和運輸,這嚴重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區(qū)的使用。因此,陽離子聚合物特別適合作為脂質(zhì)體納米顆粒的替代品。陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。遼寧體外轉(zhuǎn)染試劑
脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs),是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面,**初與??吭陉栯x子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物,然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段,脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實的核脂質(zhì)顆粒。復(fù)合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復(fù)合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結(jié)構(gòu)的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復(fù)合物的技術(shù)。除了靜電吸引外,疏水相互作用被認為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復(fù)合物形成。因此,根據(jù)正電荷(陽離子脂質(zhì))與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比,脂質(zhì)體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用,或通過與質(zhì)膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進入細胞。甘肅轉(zhuǎn)染試劑靠譜PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。
化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì),以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸,并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞,因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率,如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中,觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上,使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV,而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中,啟動子的類型也被認為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個因素,因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長超過20個殘基時,它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn),配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達。當(dāng)ASOR共價附著在PLL上時,受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外,與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來,并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性,但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明,與PLL相比,PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA,并且在相同的多陽離子/pDNA質(zhì)量比下,PLO/pDNA復(fù)合物比PLL/pDNA復(fù)合物更耐破壞。然而,由于其介導(dǎo)內(nèi)體逃逸的能力較差,帶正電的多氨基酸的轉(zhuǎn)染效率仍然很低。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。
PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的,是***個用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中,PHP可以在不到兩個小時的時間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而,PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間,分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快,但與DNA絡(luò)合時更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細胞,測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運聚合物,PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當(dāng)。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明,PHP酯是一種潛在的基因載體。納米顆粒,由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力,在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。甘肅轉(zhuǎn)染試劑靠譜
陽離子聚合物是一種非病毒載體。遼寧體外轉(zhuǎn)染試劑
陽離子聚合物是一種非病毒載體,其結(jié)構(gòu)的一個共同特征是分子中存在許多帶正電的基團,這些基團被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。陽離子聚合物可以通過靜電相互作用結(jié)合核酸,并將其凝聚成小的納米顆粒。正電荷改善了與帶負電荷的細胞膜的相互作用,并幫助多聚體在溶酶體降解發(fā)生之前逃離核內(nèi)體。隨后,多聚體通過陽離子聚合物上帶正電基團介導(dǎo)的質(zhì)子海綿效應(yīng)從核內(nèi)體中逸出。此外,核酸必須與陽離子聚合物分離,才能**終發(fā)揮其功能。成功的核酸轉(zhuǎn)染需要轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性低。在確定陽離子聚合物是否是合適的核酸轉(zhuǎn)染試劑時,必須考慮這兩個特點。一般認為,陽離子聚合物的分子量越高,其包封核酸和被細胞攝取的能力越強,細胞活力和核酸釋放越差。另一方面,分子量越低的聚合物,其濃縮核酸和被細胞攝取的能力就越低,但在細胞毒性和核酸釋放方面則表現(xiàn)得更好。因此,轉(zhuǎn)染時應(yīng)慎重考慮陽離子聚合物的分子量。一些化學(xué)修飾,如聚乙二醇化和膽固醇修飾,可以***改善聚合物的性能。此外,可生物降解材料是降低細胞毒性的有效手段。遼寧體外轉(zhuǎn)染試劑
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