脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽(yáng)離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負(fù)電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與?？吭陉?yáng)離子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物，然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段，脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實(shí)的核脂質(zhì)顆粒。復(fù)合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復(fù)合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結(jié)構(gòu)的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復(fù)合物的技術(shù)。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認(rèn)為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復(fù)合物形成。因此，根據(jù)正電荷(陽(yáng)離子脂質(zhì))與負(fù)電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質(zhì)體可能通過(guò)與細(xì)胞表面的蛋白聚糖基團(tuán)等帶電殘基的靜電相互作用，或通過(guò)與質(zhì)膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進(jìn)入細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)推薦使用血清減少或無(wú)血清培養(yǎng)基包括陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。湖南重慶轉(zhuǎn)染試劑

**近一項(xiàng)與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是，陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn)，與電中性脂質(zhì)體相比，使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多，CLs通過(guò)添加5mol%聚乙二醇來(lái)穩(wěn)定。在兩種人類(lèi)**類(lèi)型(LS174T和MCAIV)和兩個(gè)位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實(shí)現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是，注射后24小時(shí)，脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。四川轉(zhuǎn)染試劑公司在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類(lèi)似，RNA可以通過(guò)基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率，因?yàn)楹笳卟恍枰┰胶四?。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達(dá)特定的，所需的蛋白質(zhì)。然而，RNA轉(zhuǎn)染后，蛋白質(zhì)表達(dá)是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對(duì)較差，因此在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸時(shí)更容易降解。小RNA是長(zhǎng)度為18-200個(gè)堿基對(duì)(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過(guò)抑制目標(biāo)mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。與miRNAs和piRNAs類(lèi)似，siRNA也在調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)中發(fā)揮作用。siRNA的長(zhǎng)度通常為20-24bp，可表達(dá)為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結(jié)合mRNA上的互補(bǔ)序列來(lái)降解它。

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項(xiàng)體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細(xì)胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤(rùn)細(xì)胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽(yáng)離子脂質(zhì)本身不會(huì)引起免疫反應(yīng)，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項(xiàng)囊性纖維化臨床試驗(yàn)中，急性輕度流感樣癥狀被認(rèn)為是由DNA依賴效應(yīng)引起的，而對(duì)照組(*脂質(zhì)組)沒(méi)有觀察到這種效應(yīng)。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學(xué)或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠(yuǎn)離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導(dǎo)致體外小鼠脾細(xì)胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細(xì)胞因子分泌減少。該方案還增加了轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠(yuǎn)離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進(jìn)行被動(dòng)靶向，也能提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對(duì)短暫。

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對(duì)照相比，至少經(jīng)歷一次凍融循環(huán)后，HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細(xì)胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率更高，且細(xì)胞活力不受影響。一種可能的解釋是，冷凍解凍可以增強(qiáng)分子重排分散，從而允許更高的分散率，從而允許核酸之間很大程度的接觸，形成更多的轉(zhuǎn)染復(fù)合物。然而，還需要更多的研究來(lái)支持這一做法，因?yàn)閮鋈谶^(guò)程也被認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致再結(jié)晶，從而破壞一些化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。貴州DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細(xì)胞的過(guò)程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細(xì)胞中表達(dá)。湖南重慶轉(zhuǎn)染試劑

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項(xiàng)研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對(duì)于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會(huì)發(fā)生不斷的變化。過(guò)多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會(huì)導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定，還會(huì)改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個(gè)階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過(guò)程中，在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中，以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí))，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設(shè)計(jì)具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。湖南重慶轉(zhuǎn)染試劑