在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細胞因子介導的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡、先天或適應性免疫反應根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學病變，但肺部沒有不良反應。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。寧夏高分子轉(zhuǎn)染試劑

在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。通常，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和寡核苷酸轉(zhuǎn)染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉(zhuǎn)染對照和模擬轉(zhuǎn)染對照。陽性對照是先前已被證明對轉(zhuǎn)染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉(zhuǎn)染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉(zhuǎn)染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉(zhuǎn)染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉(zhuǎn)染的對照包括不含轉(zhuǎn)染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉(zhuǎn)染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉(zhuǎn)染是指不含遺傳靶標或核酸的轉(zhuǎn)染，可以評估轉(zhuǎn)染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實驗中，推薦使用空質(zhì)粒對照作為模擬轉(zhuǎn)染對照。江西shRNA轉(zhuǎn)染試劑一項與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是，陽離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向的血管系統(tǒng)。

流式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉(zhuǎn)染效率。另一種評估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過監(jiān)測轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達。將轉(zhuǎn)基因引入細胞可能會改變由轉(zhuǎn)基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉(zhuǎn)染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質(zhì)表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式細胞術(shù)進行定量檢測。通過檢查特定蛋白表達來評估轉(zhuǎn)染效率更具可重復性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問題和獲得假陰性結(jié)果的可能性，這可能是由于不及時測定蛋白質(zhì)表達引起的，仍然是使用這些方法的缺點。

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結(jié)合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設(shè)計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細胞膜具有更高的結(jié)合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強其核糖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結(jié)構(gòu)使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結(jié)合親和力。NA基寡核苷酸的應用已被報道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉(zhuǎn)染不需要轉(zhuǎn)染試劑，這可以比較大限度地減少轉(zhuǎn)染過程中試劑的二次效應。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。

作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉(zhuǎn)染。另一個有趣的觀察結(jié)果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時，在轉(zhuǎn)染原代細胞時，化學轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。脂質(zhì)顆粒的加入導致內(nèi)體DNA釋放增加。湖南陽離子轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。寧夏高分子轉(zhuǎn)染試劑

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。寧夏高分子轉(zhuǎn)染試劑