異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細管區(qū)帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應基團，這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應性。目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。河南蘇州熒光染料

熒光染料在細胞實驗中具有廣泛的應用1、細胞膜標記：可以使用熒光染料標記細胞膜，以觀察和研究細胞膜的動態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標記：用熒光染料標記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復制、轉(zhuǎn)錄、修復等過程3、蛋白質(zhì)標記：通過熒光染料標記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運動等特性。4、細胞器標記：使用特定波長的熒光染料可以標記和可視化細胞中的線粒體、溶酶體等細胞器。5、神經(jīng)科學應用：熒光染料在神經(jīng)科學中也有廣泛應用，如標記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號的傳遞等。6、基因表達分析：通過熒光染料標記基因表達產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達水平和細胞中的分布情況。貴州熒光染料合成脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素熒光染料。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右，它的熒光肉眼觀察很明亮，并且對pH不敏感，在共聚焦顯微鏡中可以用532nm（肩峰）或者556nm（頂峰）的激光束激發(fā)，在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy3也是Dil等細胞電位追蹤劑的母核，所以它是在生物技術(shù)中非常有用的熒光染料。在熒光成像時，Cy3的背景熒光一般認為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標記蛋白，抗體，多肽等，它常見的使用是標記核酸分子（DNA和RNA）?；跓晒鈭D譜的相似性，Cy3可以被TAMRA，TRITC, BODIPY TMR等染料替代，在需要更明亮，更穩(wěn)定的替代物時，可以考慮使用AF547或者AF555等。DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細胞進行多色成像和流式分析。

Hoechst33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。用于細胞核染色時，推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：Hoechst33258對人體有害，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。抗熒光淬滅封片液(P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作注意事項：Hoechst33342對人體有一定刺激性，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。PI常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。河南蘇州熒光染料

異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術(shù)中。河南蘇州熒光染料

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩毎N類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調(diào)整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 河南蘇州熒光染料