在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。例如，siRNA*對(duì)一個(gè)靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個(gè)下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類(lèi)型的短長(zhǎng)度寡核苷酸來(lái)模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補(bǔ)的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達(dá)。PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。青海轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯(cuò)的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹(shù)狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進(jìn)了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運(yùn)動(dòng)性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測(cè)試疫苗設(shè)計(jì)的免疫原性。根據(jù)研究結(jié)果，由于同時(shí)包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復(fù)合物的小鼠中，觀察到**強(qiáng)的t細(xì)胞反應(yīng)，并且這些反應(yīng)明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動(dòng)物組。廣東lipo3000轉(zhuǎn)染試劑在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)**。細(xì)菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過(guò)內(nèi)部DNA修復(fù)過(guò)程促進(jìn)基因編輯。有研究指出，陽(yáng)離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當(dāng)大質(zhì)粒通過(guò)PC傳遞時(shí)，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個(gè)基因組位點(diǎn):血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開(kāi)發(fā)了巨噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cas9表達(dá)質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽(yáng)離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無(wú)法在靶組織和細(xì)胞中進(jìn)行精確基因編輯的問(wèn)題(CLAN)?；陉?yáng)離子聚合物的基因***在臨床試驗(yàn)中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段。

攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進(jìn)一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過(guò)存在合適的真核啟動(dòng)子促進(jìn)外源轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。病毒載體可能在宿主細(xì)胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對(duì)較低。需要一種傳遞機(jī)制來(lái)促進(jìn)靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強(qiáng)載體載體復(fù)合物與宿主細(xì)胞膜之間的接觸，從而促進(jìn)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。設(shè)計(jì)和啟動(dòng)轉(zhuǎn)染試驗(yàn)可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類(lèi)繁多的情況下。基于病毒的轉(zhuǎn)染，或者更具體地稱(chēng)為轉(zhuǎn)導(dǎo)，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。

不同種類(lèi)的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測(cè)試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽(yáng)離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對(duì)COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過(guò)在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實(shí)現(xiàn)了與市買(mǎi)的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開(kāi)發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。福建fugene轉(zhuǎn)染試劑

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類(lèi)型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。青海轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱(chēng)為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。青海轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞實(shí)驗(yàn)