陽(yáng)離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽(yáng)離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來(lái)穩(wěn)定陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹(shù)狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒(méi)有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽(yáng)離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。吉林轉(zhuǎn)染試劑定制

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來(lái)可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過(guò)將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來(lái)修飾納米粒子，有助于改善它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸。將納米顆粒靶向到細(xì)胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過(guò)磁轉(zhuǎn)染來(lái)實(shí)現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當(dāng)?shù)男屎透偷募?xì)胞毒性，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)相似水平的基因表達(dá)，特別是考慮到該技術(shù)可能導(dǎo)致副作用。新疆長(zhǎng)沙轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細(xì)胞的過(guò)程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細(xì)胞中表達(dá)。

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。這可以通過(guò)引入含有熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識(shí)別，然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達(dá)。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對(duì)宿主細(xì)胞中特定基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說(shuō)，是轉(zhuǎn)錄后對(duì)特定基因表達(dá)的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時(shí)共轉(zhuǎn)染到靶細(xì)胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達(dá)將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對(duì)靶宿主細(xì)胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細(xì)胞類型中特定下游基因的表達(dá)，那么預(yù)計(jì)將其抑制劑序列同時(shí)轉(zhuǎn)染到同一細(xì)胞中會(huì)降低單獨(dú)miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比，涉及將多個(gè)核酸轉(zhuǎn)移到同一細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因?yàn)椴⒎撬泻怂犷愋投寄苡行мD(zhuǎn)移，這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細(xì)胞類型。

基于非病毒的轉(zhuǎn)染方法可以進(jìn)一步分為物理/機(jī)械方法和化學(xué)方法。常用的物理/機(jī)械轉(zhuǎn)染方法包括電穿孔、聲孔、磁***、基因顯微注射和激光照射。電穿孔是一種常用的物理轉(zhuǎn)染方法，利用電壓瞬間增加細(xì)胞膜通透性，允許外來(lái)核酸進(jìn)入。這種方法通常用于轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞、干細(xì)胞和B細(xì)胞系等難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。然而，使用高壓可能導(dǎo)致細(xì)胞壞死、凋亡和長(zhǎng)久性細(xì)胞損傷。超聲輔助轉(zhuǎn)染或超聲穿孔涉及使用微泡技術(shù)在細(xì)胞膜上制造孔，以減輕遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，而激光照射輔助轉(zhuǎn)染使用激光束在質(zhì)膜上制造小孔，允許外來(lái)遺傳物質(zhì)進(jìn)入。與電穿孔一樣，超聲穿孔和激光輔助轉(zhuǎn)染也有破壞細(xì)胞膜和不可逆細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。相比之下，磁輔助轉(zhuǎn)染，或使用磁力來(lái)幫助轉(zhuǎn)移外來(lái)遺傳物質(zhì)的磁轉(zhuǎn)染，似乎對(duì)生物的破壞性較盡管效率較低，但對(duì)宿主細(xì)胞的破壞較小。另一方面，基因顯微注射涉及使用特定的針刺穿細(xì)胞，將所需的核酸注射到宿主細(xì)胞的細(xì)胞核中。然而，這項(xiàng)技術(shù)需要經(jīng)過(guò)專門(mén)訓(xùn)練的人員或機(jī)器人系統(tǒng)，他們可以高精度地執(zhí)行程序，以防止細(xì)胞損傷，因此在基因***等臨床應(yīng)用中具有重要價(jià)值。與物理或機(jī)械轉(zhuǎn)染方法相比，化學(xué)轉(zhuǎn)染涉及使用專門(mén)設(shè)計(jì)的化學(xué)品或化合物來(lái)幫助將外源核酸轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過(guò)基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。

PHP是由天然來(lái)源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是***個(gè)用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中，PHP可以在不到兩個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個(gè)月的時(shí)間，分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨(dú)存在時(shí)降解很快，但與DNA絡(luò)合時(shí)更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細(xì)胞，測(cè)定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運(yùn)聚合物，PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當(dāng)。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細(xì)胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明，PHP酯是一種潛在的基因載體。在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對(duì)短暫。山西廣州轉(zhuǎn)染試劑

常用的物理/機(jī)械轉(zhuǎn)染方法包括電穿孔、聲孔、基因顯微注射和激光照射。吉林轉(zhuǎn)染試劑定制

不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測(cè)試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽(yáng)離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對(duì)COS-1細(xì)胞系(非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達(dá)效率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過(guò)在HepG2細(xì)胞(人肝細(xì)胞肝*細(xì)胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實(shí)現(xiàn)了與市買(mǎi)的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達(dá)水平。吉林轉(zhuǎn)染試劑定制