羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化,量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點:--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針,必須對其進行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團的修飾來實現(xiàn)。與TRITC一樣,羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm(比較大吸收波長)和576nm(比較大發(fā)射)。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。廣西熒光染料luciferin
熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料,由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā),在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速,已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。廣東免疫熒光熒光染料PI常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測,常用于流式細胞儀分析。
在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點,即它可能很耗時,并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外,與許多其他熒光團相比,生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一,由238個氨基酸組成,其中三個負責發(fā)出可見綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中,熒光團與水母發(fā)光蛋白(一種蛋白質(zhì))相互作用,當添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組,研究人員可以使用負責產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里,在將復(fù)合物插入細胞之前,該基因與另一個基因(負責產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個基因)結(jié)合。如果細胞產(chǎn)生綠色熒光,研究人員就可以明顯看出該細胞能夠表達目標基因。GFP由488nm激光線激發(fā),可在510nm處檢測。來自熒光團的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標記物,綠色熒光蛋白用于以下功能:監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質(zhì)定位*檢測轉(zhuǎn)基因表達
蛋白熒光標記技術(shù)是目前**為常見的蛋白體外標記技術(shù),利用級聯(lián)放大反應(yīng)原理,將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結(jié)合后,標記到特異性抗原或抗體分子上,應(yīng)用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應(yīng)而產(chǎn)生顏色、光譜等變化,以分析示蹤相應(yīng)抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下,借助高度靈敏性的熒光檢測,在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化,從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術(shù)不斷發(fā)展,各類熒光素廣泛應(yīng)用于生物實驗中,目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素,其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團,繼而生成分子探針,通過熒光成像進行相應(yīng)檢測。南京星葉生物提供多種性價比高的各類活化熒光素,例如Cy系列、Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)等。
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學中,熒光團可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測的抗體等,因為它能夠發(fā)出明亮的熒光。由于熒光團往往會很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細胞術(shù)?!鶆e藻藍蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用,但它***用于流式細胞術(shù)、ELISA、微陣列等過程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑,它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。廣西熒光染料luciferin
目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。廣西熒光染料luciferin
在熒光顯微術(shù)中,不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣,而且對核酸也感興趣。有時有必要通過檢測細胞核來確定細胞的確切位置或數(shù)量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比,DAPI在DNA上的熒光強度增加。染料被UV(紫外線)光激發(fā),比較大激發(fā)波長為358nm。發(fā)射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測到RNA結(jié)合。在這種情況下,發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細胞膜。因此,該染料既可用于固定細胞也可用于活細胞。廣西熒光染料luciferin