常用抗體標(biāo)記熒光染料的特性及其應(yīng)用

1、FITC:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)525nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強(qiáng)度易受PH值影響，PH值降低時(shí)其熒光強(qiáng)度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)519nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性，非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，歡迎咨詢。3、Cy3:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)570nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè):3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于PE。 異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。西藏ivis熒光染料

PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。盡管PI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿過(guò)破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。2.染色過(guò)程（1）將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基）。（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。（4）用535nm激發(fā)波長(zhǎng)，615nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光器的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項(xiàng)：PI對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。甘肅蛋白質(zhì)熒光染料CY7.5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。

三、流式細(xì)胞儀分析1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，接種到孔板，過(guò)夜培養(yǎng)。2、如果要進(jìn)行藥物刺激，在細(xì)胞中加入感興趣的藥物進(jìn)行干預(yù)，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細(xì)胞，37℃避光孵育15min或更長(zhǎng)時(shí)間?！咀⒁狻浚河捎诩?xì)胞種類和實(shí)驗(yàn)體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時(shí)間可以根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)或參考文獻(xiàn)自行調(diào)整。4、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

四、實(shí)驗(yàn)案例1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無(wú)血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細(xì)胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察.

羅丹明123一種可對(duì)活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。羅丹明123可透過(guò)細(xì)胞膜且在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測(cè)線粒體膜電位，也常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長(zhǎng)為507nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行調(diào)整?！咀⒁狻浚簩?duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過(guò)0.1%，以避免DMSO對(duì)細(xì)胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個(gè)/mL。2、在載玻片上孵育細(xì)胞，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時(shí)。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。 DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度**增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在***成像中用來(lái)示蹤。DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。浙江重慶熒光染料

目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。西藏ivis熒光染料

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見(jiàn)光后，能把短波長(zhǎng)的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光波而反射出來(lái)，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個(gè)供體及一個(gè)受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長(zhǎng)被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射一個(gè)光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開(kāi)發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見(jiàn)光及紅外的整個(gè)光譜范圍。西藏ivis熒光染料