所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細(xì)計(jì)算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動(dòng)混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應(yīng)管底部。請(qǐng)勿混勻，否則2)將反應(yīng)管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準(zhǔn)備SepHadexG-25柱。2)將反應(yīng)混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運(yùn)行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。羅丹明123一種可對(duì)活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。中國臺(tái)灣南京熒光染料

注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定比較高信號(hào)檢測時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長。 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。免疫組化熒光染料APC吲哚菁綠在生物識(shí)別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。

FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán)，生成分子探針，并通過熒光成像進(jìn)行檢測。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí)，它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無放射物污染、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來越廣泛的應(yīng)用。

南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）

且Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）

在熒光顯微術(shù)中，不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣，而且對(duì)核酸也感興趣。有時(shí)有必要通過檢測細(xì)胞核來確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吲哚），主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比，DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV（紫外線）光激發(fā)，比較大激發(fā)波長為358nm。發(fā)射光譜較寬，峰值在461nm。弱熒光也可以檢測到RNA結(jié)合。在這種情況下，發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是，DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此，該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。

一、體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲(chǔ)存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。新疆熒光染料Fluor 680

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。中國臺(tái)灣南京熒光染料

熒光染料在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用1、細(xì)胞膜標(biāo)記：可以使用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞膜，以觀察和研究細(xì)胞膜的動(dòng)態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標(biāo)記：用熒光染料標(biāo)記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等過程3、蛋白質(zhì)標(biāo)記：通過熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運(yùn)動(dòng)等特性。4、細(xì)胞器標(biāo)記：使用特定波長的熒光染料可以標(biāo)記和可視化細(xì)胞中的線粒體、溶酶體等細(xì)胞器。5、神經(jīng)科學(xué)應(yīng)用：熒光染料在神經(jīng)科學(xué)中也有廣泛應(yīng)用，如標(biāo)記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號(hào)的傳遞等。6、基因表達(dá)分析：通過熒光染料標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達(dá)水平和細(xì)胞中的分布情況。中國臺(tái)灣南京熒光染料