肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤細胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽離子脂質(zhì)本身不會引起免疫反應(yīng)，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項囊性纖維化臨床試驗中，急性輕度流感樣癥狀被認為是由DNA依賴效應(yīng)引起的，而對照組(*脂質(zhì)組)沒有觀察到這種效應(yīng)。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學(xué)或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導(dǎo)致體外小鼠脾細胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細胞因子分泌減少。該方案還增加了轉(zhuǎn)基因表達水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進行被動靶向，也能提高轉(zhuǎn)基因表達水平。Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。細胞轉(zhuǎn)染試劑毒性低

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子，有助于改善它們在細胞內(nèi)的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過磁轉(zhuǎn)染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當?shù)男屎透偷募毎拘?，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會導(dǎo)致體內(nèi)相似水平的基因表達，特別是考慮到該技術(shù)可能導(dǎo)致副作用。新疆轉(zhuǎn)染試劑代做由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來穩(wěn)定陽離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。

脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來，進入核周區(qū)域，***進入細胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質(zhì)粒而言，較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，但也被證明會發(fā)生。評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。

基因***是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。通過攜帶質(zhì)粒DNA、mRNA和siRNA，陽離子聚合物實現(xiàn)了與***相關(guān)的功能，如基因增強、基因抑制和基因組編輯。基因*****直接、或許也是**簡單的策略是添加新的蛋白質(zhì)編碼基因。在當前**背景下，mRNA疫苗的大規(guī)模使用點燃了人們對核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達任何一種蛋白質(zhì);因此，除了作為疫苗預(yù)防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術(shù)是基于脂質(zhì)納米顆粒平臺，該技術(shù)的**掌握在少數(shù)幾家公司手中。此外，由脂質(zhì)納米顆粒組成的mRNA疫苗應(yīng)在**溫下儲存和運輸，這嚴重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區(qū)的使用。因此，陽離子聚合物特別適合作為脂質(zhì)體納米顆粒的替代品。脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。浙江jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。細胞轉(zhuǎn)染試劑毒性低

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場**。細菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過內(nèi)部DNA修復(fù)過程促進基因編輯。有研究指出，陽離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當大質(zhì)粒通過PC傳遞時，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個基因組位點:血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細胞特異性啟動子驅(qū)動的Cas9表達質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無法在靶組織和細胞中進行精確基因編輯的問題(CLAN)?；陉栯x子聚合物的基因***在臨床試驗中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段。細胞轉(zhuǎn)染試劑毒性低