轉(zhuǎn)染是將外來(lái)核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過(guò)程。在過(guò)去的30年里,轉(zhuǎn)染因其廣泛應(yīng)用于研究疾病的細(xì)胞過(guò)程和分子機(jī)制而越來(lái)越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預(yù)后的特定生物標(biāo)志物。此外,轉(zhuǎn)染可以作為基因***中的策略之一,用于***無(wú)法***的遺傳性遺傳病。***,生命科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步允許將不同類型的核酸轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉(zhuǎn)染可分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩種類型。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指通過(guò)將外源DNA整合到宿主核基因組中,或在宿主核中作為染色體外元件維持一個(gè)外源載體來(lái)維持轉(zhuǎn)基因的長(zhǎng)期表達(dá)。該轉(zhuǎn)基因可然后通過(guò)細(xì)胞的復(fù)制進(jìn)行本構(gòu)性表達(dá)。相比之下,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不需要將核酸整合到宿主細(xì)胞基因組中。核酸可以以質(zhì)粒的形式或寡核苷酸的形式轉(zhuǎn)染。因此,隨著宿主細(xì)胞的復(fù)制,轉(zhuǎn)基因表達(dá)**終會(huì)丟失。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染在需要大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)的長(zhǎng)期遺傳和藥理學(xué)研究中很有用。在轉(zhuǎn)染中,DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。安徽DNA轉(zhuǎn)染試劑
納米顆粒在疫苗遞送中往往表現(xiàn)出***的佐劑作用。陽(yáng)離子聚合物,包括PEI、聚賴氨酸、陽(yáng)離子葡聚糖和陽(yáng)離子明膠,已經(jīng)有報(bào)道顯示出對(duì)Th1反應(yīng)的強(qiáng)烈刺激,其特征是誘導(dǎo)CD4(+)T細(xì)胞增殖和th1相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。此外,陽(yáng)離子聚合物強(qiáng)烈抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分泌TNF-α。陽(yáng)離子聚合物的刺激能力與其陽(yáng)離子化程度有關(guān),陽(yáng)離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會(huì)影響其刺激能力,分子越大意味著刺激能力越大。遼寧小鼠轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前,應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。
陽(yáng)離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合,并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外,由于陽(yáng)離子脂質(zhì)相互排斥,因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來(lái)穩(wěn)定陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)懸浮液,并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒(méi)有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率,盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽(yáng)離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述,CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素,這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性,特別是在體內(nèi)。
攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進(jìn)一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過(guò)存在合適的真核啟動(dòng)子促進(jìn)外源轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。病毒載體可能在宿主細(xì)胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng),而非病毒載體的免疫原性相對(duì)較低。需要一種傳遞機(jī)制來(lái)促進(jìn)靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。其中一些需要物理方法,而另一些涉及使用遞送載體,可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體,以幫助增強(qiáng)載體載體復(fù)合物與宿主細(xì)胞膜之間的接觸,從而促進(jìn)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。設(shè)計(jì)和啟動(dòng)轉(zhuǎn)染試驗(yàn)可能具有挑戰(zhàn)性,特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況下。但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。
為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項(xiàng)研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定,對(duì)于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會(huì)發(fā)生不斷的變化。過(guò)多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落,而新的成分,如脂蛋白,可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會(huì)導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定,還會(huì)改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個(gè)階段(在給藥部位,在血液循環(huán)過(guò)程中,在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中,以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí)),多聚物和脂聚物的組成如何變化,可能有助于設(shè)計(jì)具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。轉(zhuǎn)染是將外來(lái)核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過(guò)程。西藏干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
PHP是由天然來(lái)源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的,是一個(gè)用作基因載體的聚酯。安徽DNA轉(zhuǎn)染試劑
在轉(zhuǎn)染中,DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、多個(gè)克隆位點(diǎn)、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源,而多個(gè)克隆位點(diǎn)包含獨(dú)特的內(nèi)切酶切割位點(diǎn),用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛?dòng)子(如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比,使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會(huì)產(chǎn)生更高的效率,線性DNA更容易被外切酶降解。然而,線性化的DNA更具重組性,因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。安徽DNA轉(zhuǎn)染試劑